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(無題) 削除/引用 No.1042-3 - 2011/10/11 (火) 08:22:58 - ~ 1本にすることが目的であれば、その非特異増幅配列を読んで、どこがアニーリングしているのかを確認し、 アニールしている部分を削るなり、フラグメントの端からずらしてアニールしても増幅しないようにするなりしてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1042-2 - 2011/10/11 (火) 07:28:39 - TK-1 何のためにPCRをかけているんですか？きれいな一本バンドにする必要があるんでしょうか？ もし、３つのフラグメントがつながったものをPCRで増やしたいだけであれば、そのバンドを切り出してクローニングすればいいと思います。 それ以外の目的？？私はあまりやったことはありません。

3フラグメントのオーバーラップPCR非特異バンドについて 削除/引用 No.1042-1 - 2011/10/11 (火) 03:48:25 - ナナシ ３つのフラグメントでオーバーラップＰＣＲを行っています。 目的バンドは増幅するのですが、すぐその下に非特異的バンドと思われるものが現れて困っています。 ただ、そのバンドが非特異的なものなのか、２つのフラグメントのみくっついて増幅したものなのかはわかりかねます（私はこちらだと思っていますが。。）。 ホットスタート、アニーリング、ゲル切り出し後のネイステッドＰＣＲ等は全て試しました。 ですが、どうしても増幅します。 プライマーを新しく作成しなおしたら、綺麗な一本バンドができるでしょうか？ 行き詰っています。回答お願いいたします。

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