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(無題) 削除/引用 No.1010-5 - 2011/10/04 (火) 19:31:39 - reno なるほど。 アルカリの方がよいんですね。 buffer組成ありがとうございます！ そして的確なアドバイスありがとうございました！ m( ____ )m

バファー 削除/引用 No.1010-4 - 2011/10/04 (火) 18:40:41 - ema PBSはだいたいpH７くらいですよね。まあ、それでも良いのですが、抗体のプレートタイターはアルカリ側の方が良いので、私はELISA等　抗体を固相のときは 100mM Carbonate buffer pH9.5 8.4g/NaHCO3 3.56g/Na2CO3 /1L このまま混ぜるとajust pH9.5;ただ試薬が持たないので私は50ml分とかに縮小して作成していました。 細胞かける前に洗って（PBSとか培地とかで）細胞培養環境に戻しておいてください。

(無題) 削除/引用 No.1010-3 - 2011/10/04 (火) 17:34:40 - reno emaさん 回答ありがとうございます。 大変助かりました。 質問返しですいません。 希釈bufferについてですが、 PBSでよいとしているプロトコルをいくつか 見かけたので、それでよいと思っていたのですが、 特別なものが必要でしょうか？？

OKです 削除/引用 No.1010-2 - 2011/10/04 (火) 14:53:01 - ema ＞１μg/mlに希釈した抗体液をwellに加え、overnightなどで放置して、残った液は回収した状態 です。（希釈バッファーはちゃんと作ってね） 回収した液はもったいなければ数回使用してます。（すこし濃度がちがうと神経質になるならやめましょう） 量の節約というよりか 液体中に加えるのと、固相とでは抗体と細胞が接触確率が変わるので；固相の方が軽く遠心で底面に細胞をもっていけば確実に抗体と接触する；好む人がいます。 ＞プレートコート時は、dishのフタを閉めた状態 それでも水分が蒸散するので周りをパラフィルムで巻きO/N。

抗体の固相化法について 削除/引用 No.1010-1 - 2011/10/04 (火) 13:13:10 - reno 大変初歩的な質問で申し訳ないのですが、 抗体の固相化について質問させてください。 論文で「抗体１μg/ml plate-bounded」というような 表現がありますが、 これは、１μg/mlに希釈した抗体液をwellに加え、 overnightなどで放置して、残った液は回収した状態、 と、解釈してよいのでしょうか？ プレートコート時は、dishのフタを閉めた状態、 つまり意図的に乾かさない状態で放置して よいのでしょうか？ 現在、t細胞を活性化すべく刺激法を調べているのですが、 この解釈でよいとすれば、 濃度を考えると培地に直接CD3抗体を入れるより、 プレートコートした方が大きく抗体の節約になると思う のですが、解釈間違ってないかどうか不安なので 質問させていただきました。

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