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細胞傷害性試験(Cr release assay) トピック削除
No.79-TOPIC - 2007/08/18 (土) 16:52:23 - ひぶー
targetはマウス細胞、effectorに別のマウスserumを用いた抗体依存細胞傷害性試験を行いたい(effector cellとしてのNK cellなどは用いずに)のですが、Cr releaseのためのincubation時間は4時間程度必要でしょうか?また、serumとco-cultureするのはtarget cellをCr標識した後がいいのでしょうか?またその場合、serumとのculture時間は1時間程度でいいのでしょうか(もし1時間程度ならばCrは十分にreleaseされているのでしょうか)?教えてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.79-3 - 2007/08/23 (木) 14:21:02 - sandiegan
私がこの実験をしたのは20年位前ですが、ラベルに1時間、反応はeffectorによりますがNKなら4時間位、マクロファージ系なら18時間培養しました。
また、effetorを入れないtarget細胞だけのチューブを2本つくり、1本はそのまま培養(これがフリーのCr遊離)、もう1本は酸か何かで壊してMaxリリースとしてカウントしておき、effectorを入れたときの値が、この間に入っており、E:T比を変えてリニアになればOKとしていた記憶があります。

(無題) 削除/引用
No.79-2 - 2007/08/22 (水) 13:01:43 - nori
私の場合、Cr のラベル時間は2時間、effector (or serum) との co-culture は4時間で行なっています。
Cr が十分に release されているかどうかは、何をもって十分とするのかわかりませんが、effector や、ひぶーさんの場合だと ADCC 活性によると思います。

細胞傷害性試験(Cr release assay) 削除/引用
No.79-1 - 2007/08/18 (土) 16:52:23 - ひぶー
targetはマウス細胞、effectorに別のマウスserumを用いた抗体依存細胞傷害性試験を行いたい(effector cellとしてのNK cellなどは用いずに)のですが、Cr releaseのためのincubation時間は4時間程度必要でしょうか?また、serumとco-cultureするのはtarget cellをCr標識した後がいいのでしょうか?またその場合、serumとのculture時間は1時間程度でいいのでしょうか(もし1時間程度ならばCrは十分にreleaseされているのでしょうか)?教えてください。

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