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グリセロール除去 トピック削除
No.74-TOPIC - 2007/08/17 (金) 15:14:10 - Hot
モノクローナル抗体に含まれている凍結保存剤であるグリセロールを除去したいのですが、どのような方法がいいのでしょうか?
透析キットなど具体的に使用したものなどご教授ください。お願いします。
 
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是非試してみます! 削除/引用
No.74-10 - 2007/08/20 (月) 15:18:41 - Hot
回転は3000rpmでいいんですね。それでしたらあまり心配ないですよね。
限られた試料でしたので二の足を踏んでいましたが、質問して良かったです。まずは試してみます。

グリセロール除去 削除/引用
No.74-9 - 2007/08/20 (月) 15:13:18 - koutai
遠心操作によって抗体に影響があることはないと思います。
グリセロール品の抗体をPBSなどで希釈してからアミコンウルトラに入れてスイングローターで3000回転、15分程度遠心して濃縮の程度を確認しています。(濃縮が足りなければもう少し遠心時間を追加します。)これを(PBSを足す、濃縮の操作)3回繰り返します。
しかし、グリセロール品をPBSにバッファー交換した場合には沈殿がでることがあります。でも沈殿は透析操作のほうがより出やすいように思います。

(無題) 削除/引用
No.74-8 - 2007/08/20 (月) 13:00:32 - Hot
もう少し教えていただけますか?
遠心濃縮の場合、抗体への物理的な影響など
ありえないでしょうか?回転数によるとは思いますが、
何せ初めてでして、お願いします。

グリセロール除去 削除/引用
No.74-7 - 2007/08/20 (月) 12:18:00 - koutai
その量ですと、
ミリポアのアミコンウルトラ-4は最大サンプル3.5mlで、最終濃縮量50μLまでいけますのでどうでしょうか。うちではよくこれを使っています。

抗体量は500μLです 削除/引用
No.74-6 - 2007/08/20 (月) 10:09:46 - Hot
koutai 様ありがとうございます

抗体は0.25mg/mL 500μLあります。
決して多くないとは思っていますが、どうでしょう?

グリセロール除去 削除/引用
No.74-5 - 2007/08/20 (月) 08:57:39 - koutai
抗体が多くあって、濃度も濃いときは透析がおすすめです。
量も少なくて、濃度も変えたくないときは遠心濃縮(ミリポアのアミコンウルトラなど)を利用します。グリセロール品を10倍にPBSで希釈し、1/10に遠心濃縮します。これを3回も繰り返せば透析したのと同じ効果が得られます。

Slide-A-Lyzerは 削除/引用
No.74-4 - 2007/08/20 (月) 08:52:15 - Hot
抗体関係 様、page 様ありがとうございます。

Slide-A-Lyzer MINI Dialysis U. MWCO3.5K
というのを購入したんですが、pageさんのご意見を
みますと仮に外液を吸って体積が増えてしまっても
グリセロールは除去されますでしょうか?
その場合抗体濃度はタンパク濃度を測定すれば
一応使用できると思っていいのでしょうか?

もしくは透析以外に方法があれば教えてください。

(無題) 削除/引用
No.74-3 - 2007/08/20 (月) 06:27:22 - page
抗体関係者様
透析でのグリセロール除去は難しい場合が多いと思うのですがいかがでしょうか。
Slide-A-Lyzerは私もよく使用しますが、グリセロール入りのサンプルを供しますと
バッファーをすって体積がふえますよね。外液にグリセロールを加えると今度は、
グリセロールを除去できないし、と、もし何かテクニックが御座いましたら
お教え下さい。宜しくお願い致します。

Re:グリセロールを除去 削除/引用
No.74-2 - 2007/08/19 (日) 16:34:46 - 抗体関係
抗体などの少量の透析にはピアスのSlide-A-Lyzer透析カセット を使っています。使い方は簡単です。

グリセロール除去 削除/引用
No.74-1 - 2007/08/17 (金) 15:14:10 - Hot
モノクローナル抗体に含まれている凍結保存剤であるグリセロールを除去したいのですが、どのような方法がいいのでしょうか?
透析キットなど具体的に使用したものなどご教授ください。お願いします。

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