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腫瘍移植マウスからのサンプルでウェスタンブロット トピック削除
No.2794-TOPIC - 2009/02/04 (水) 10:29:57 - うま
いつもお世話になっております。
現在、樹立されたマウス腫瘍細胞を皮下に注射して担癌マウスを作製し、
薬剤投与後にその腫瘍を取って腫瘍の変化を評価する実験を行っています。
あるタンパクの発現量の変化を見るために、回収した腫瘍結節を用いた
ウエスタンブロットを行いましたが、血清蛋白のためかきれいにバンドが
でません。
そのマウス腫瘍細胞のin vitroの実験ではきれいにバンドが
確認できているので、腫瘍細胞や抗体には問題はないと思われます。
また、腫瘍皮下結節をメスで粘りが出るまで刻んでから、市販の蛋白
回収液を使用して溶解している蛋白を回収しております。
in vivoの実験は初めてですので、サンプル処理について何か工夫すると
良い点などございましたら、お教えいただければ幸いです。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2794-4 - 2009/02/04 (水) 23:57:24 - うーん
>それともこのような蛋白回収液に溶解したサンプルに対して行うの
>でしょうか?

はい。
アセトン脱脂で調べてみてください。

脱脂? 削除/引用
No.2794-3 - 2009/02/04 (水) 23:17:16 - うま
ご回答ありがとうございます。
「脱脂」というのは具体的にはどのような方法がありますでしょうか?
腫瘍結節に対して行うのでしょうか?
それともこのような蛋白回収液に溶解したサンプルに対して行うの
でしょうか?
(ちなみに蛋白回収にはNovagenのcytobusterというのを使用しております。)

(無題) 削除/引用
No.2794-2 - 2009/02/04 (水) 22:50:55 - うーん
腫瘍結節中の血清タンパクということでしょうか?

脱脂とかもされるといいかもです。

腫瘍移植マウスからのサンプルでウェスタンブロット 削除/引用
No.2794-1 - 2009/02/04 (水) 10:29:57 - うま
いつもお世話になっております。
現在、樹立されたマウス腫瘍細胞を皮下に注射して担癌マウスを作製し、
薬剤投与後にその腫瘍を取って腫瘍の変化を評価する実験を行っています。
あるタンパクの発現量の変化を見るために、回収した腫瘍結節を用いた
ウエスタンブロットを行いましたが、血清蛋白のためかきれいにバンドが
でません。
そのマウス腫瘍細胞のin vitroの実験ではきれいにバンドが
確認できているので、腫瘍細胞や抗体には問題はないと思われます。
また、腫瘍皮下結節をメスで粘りが出るまで刻んでから、市販の蛋白
回収液を使用して溶解している蛋白を回収しております。
in vivoの実験は初めてですので、サンプル処理について何か工夫すると
良い点などございましたら、お教えいただければ幸いです。
よろしくお願いします。

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