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(無題) 削除/引用 No.276-7 - 2007/10/04 (木) 16:55:03 - proteoichiro もしタグをつけてよいということであれば、 N末とC末に別々のタグをつけて二段階で抗体精製を行えば 全長でないものはのぞくことができる可能性があります。

(無題) 削除/引用 No.276-6 - 2007/10/03 (水) 19:40:05 - NYH やはりそうですよね… 一応今の段階でリンカー部位に怪しい配列にあたりをつけてまして、インバースＰＣＲでその部分を除いてみようかとは検討しているんですが、いかんせん時間があまりないものですから、なんとか分子量の差を利用して分離できないかと考えていたんです。 いろいろな意見、ありがとうございました。とりあえずイオン交換とゲル濾過については検討してみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.276-5 - 2007/10/03 (水) 17:11:22 - かつら このぐらいの大きさの差しかないと、それぞれの割合が少々変わる位のことは出来るかもしれませんが、綺麗に分けるというのはゲルろ過では結構難しいと思います。 某社カタログのチャートなんかを見ますと綺麗に別れているように見えますが、少なくとも私は出来ませんでした（下手なのかもしれませんが）。 私なら一応ゲルろ過を一回かけてみて、ダメならあっさり諦めます。 あとは、切れることによって電荷が大きく変わるようであれば、イオン交換にチャレンジする位でしょうか。 時間がかかっても良いなら、切れる所の配列で抗体を作って抗体カラムを作るとか。作った抗体がワークするかは別問題ですが。 正直言えば、私もカナマイシンさん同様、まずは発現条件等を変えて切れるのが少ないように採れる条件を探すほうに注力すると思います。

(無題) 削除/引用 No.276-4 - 2007/10/03 (水) 16:27:39 - カナマイシン そのくらいの差だと限外ろ過では厳しいですよね。 ふつうはゲルろ過かな。 融合した部分が切れてるならその辺のアミノ酸配列をいじってみる （制限酵素サイト変えてみる）とか、 例えばレアコドンのせいで切れてる疑いがあるならサイレント変異でコドン変えるとか。 レアコドン発現系を使うとか。 その精製タンパクを何に使うかにもよりますが、 私なら宿主も含む発現条件の検討も視野に入れそうです。

レスありがとうございます 削除/引用 No.276-3 - 2007/10/03 (水) 15:24:34 - NYH あるタンパク質（酵素）の触媒活性を上げるために遺伝子組換えにより融合タンパク質を構築していました。 それでE.coli BL21で発現させたのですが、おそらくin vivoでその融合した部分で切れているタンパク質（これが分子量約50kDa）をSDS-PAGEで確認したため、なんとか目的の融合タンパク質（約60kDa）のみを単離したいという内容です。

(無題) 削除/引用 No.276-2 - 2007/10/03 (水) 15:13:03 - a 分離というのは精製を意味してるのでしょうか？ どのような目的に使用する予定ですか？ また、これまでにどのような試みを行ってきましたか？ 公開できる情報量を増やしていただけると助言し易くなると思いますよ。

タンパク質の分離についての質問です 削除/引用 No.276-1 - 2007/10/03 (水) 14:38:13 - NYH 分子量約50kDaと60kDaのタンパク質を分離したい（欲しいのは60kDaの方）のですが、何か良い方法はありませんか？？ 溶媒は50mM tris/HCl です。

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