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ご回答ありがとうございます 削除/引用 No.2687-5 - 2009/01/21 (水) 10:23:01 - masu まっくろん さん，ナンバー９ さん，AP さん 迅速にご回答いただきありがとうございます． 試薬の温度（室温）については少し甘かった点があるので 改善したいと思います． 希釈を濃くする，インキュベーションの時間を長くする という点もどの程度長くするのか計画したいと思います． みなさんのご回答大変参考になりました． また何かありましたらよろしくお願い致します．

(無題) 削除/引用 No.2687-4 - 2009/01/20 (火) 20:47:48 - AP スタンダード希釈列を調製・保存する器具・容器への吸着ロスの可能性があると思います。 チューブ等の表面はどんな物でも、あるキャパシティーの吸着性があります。 吸着ロスによるオフセットがあっても、あるキャパシティーを超える濃度以上の希釈液なら検出できますが（直線性に影響はあるかもしれませんが）、それより濃度が低くて溶質の大部分が吸着してしまえば検出できなくて差が出ないということが起こります。 吸着を防ぐためには、 ・検出系に影響しないキャリア（BSAなど）を含んだ溶媒で希釈する。これはELISAで固相に吸着させる目的の抗原には向かないかもしれませんが、サンドウィッチELISAの場合なら大丈夫でしょう。 ・低吸着性の器具を使う。シリコナイズなどで吸着防止処理をする。とはいっても、吸着を完全に防げるわけではなく、その程度もいろいろですから、過信はできません。 ・あらかじめ、BSAなどのタンパク質溶液をあてがってブロッキングしておく。今は器具の材質がよくなってあまりやることではないかもしれませんが、昔からわりとよく使われていた方法です。

(無題) 削除/引用 No.2687-3 - 2009/01/20 (火) 20:08:21 - ナンバー９ 私もまっくろんさんと同じような回答になりますが二次抗体の希釈を濃くするとうまくいくことが有ります。 同じキットでは有りませんが、二次抗体は保存方法によっては力価が落ちてくることもありますしロットによっても変わってくる印象を持っています。

(無題) 削除/引用 No.2687-2 - 2009/01/20 (火) 19:37:40 - まっくろん 　下の方の値が出てない（検出できない）という事ですので、発色が弱いのかもと感じました。もし自分がやるとすれば、 １．1次抗体（サンプルやスタンダードタンパク）・２次抗体のインキュベーション時間を長くする ２．発色の時間を長くする 　あたりから始めると思います。また、ELISAは（他もでしょうか？）温度に影響を受けやすいので、十分に溶液の温度が上がって（プロトコールシートには大体室温と書かれています）いないと、発色は弱くなってしまいます。しっかり室温に戻してから実験される事をお進めします。参考になれば。

ELISAのスタンダード値がうまくでない 削除/引用 No.2687-1 - 2009/01/20 (火) 18:51:33 - masu 初めまして、ELISAについてご質問させてください。 現在IMMUNOTECH社の「EIA AMH/MIS」を使って測定を行っています。 スタンダードの値がうまくでないので困っています。 Calibrator（粉末）をMilliQ 0.5ccで溶かし、次のスタンダードを 作成しました。･･･150pM，81pM，27pM，9pM，3pM 0pMは付属のCalibrator0を使用しました。 測定の結果、0，3，9に変化がでません。 すべてマニュアル通りに行っており、スタンダード以外の値は 特に問題ないため、原因がわかりません。 説明不足な点もあるかと思いますが、ご指導よろしくお願い致します。

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