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(無題) 削除/引用 No.2654-6 - 2009/01/15 (木) 23:03:35 - gs86 皆さん早速ありがとうございました。 ちゃんと書いてありましたね、見落としていました。 お恥ずかしい、、、、 施設等の条件については確認します。 ウイルスは最近勉強し始めたばかりでしたので、 大変参考になりました。 ありがとございました。

(無題) 削除/引用 No.2654-5 - 2009/01/15 (木) 11:58:02 - 〜 今はどうかはしりませんが、第２世代は確かP3の施設が必要だったと記憶しています。 そのあたりがクリアーされていれば問題ないですが、でなければ第３世代のほうが無難でしょう。 でも確かに明らかに titerは落ちますね。 間違っていたらすみません。

(無題) 削除/引用 No.2654-4 - 2009/01/15 (木) 11:52:01 - 通りすがり >gag/pol, rev, VSVGの3つにパッケージング用ベクターが分けられている 基本的にはレンチのシステムは現在2ndと3rd generationといわれる二つのシステムが主に使われており 大きな違いはパッケージングの部分で 2nd generationのがgag/pol/revが一つのvectorに入っており 3rd generationのがgag/pol と Revが別々のvectorに 分けられているという違いです。 いずれにしてもRevが無い限りほとんどのvirus RNAは不安定だったり輸送がうまくいかなくてパッケージングは激減（というかほぼない）します。 3rdのほうが安全性が高いとされていますが、その代わりTiterがはっきりいって低いです(市販されてるのは使用したことがないのでわかりませんが)。 >RNAi consortiumのプロトコールをみると（http://www.broad.mit.edu >/genome_bio/trc/publicProtocols.html）、 >パッケージング用にgag/pol, VSVGベクターのみ使用するように書いてありま >す。 いや、今見たらはっきり >2nd generation packaging plasmid containing gag, pol and rev genes >(e.g. pCMV-dR8.91 or pCMV-dR8.74psPAX2)* とgag/pol/Reｖと書いてますね。 ここで言ってるのは上記の2nd generationのsystemのpackaging plasmidであるpCMV-dR8.91やpCMV-dR8.74あるいはpsPAX2を 使いなさいということです。 これらは全部gag/pol/Reｖを持ってるので どれでもお使いの3rd generationのgag/polおよびrevの二つのvectorの役割を 一つで果たしてくれます。 要するに市販されてるあなたのお持ちの 3rdの >gag/pol, rev, VSVGの3つにパッケージング用ベクター でも、一応できはするはずですが、 たぶんわざわざ2ndのを使えと書いてるのは 3rdでもできますがtiterが低くてうまくいかないかもしれないよ、ということでしょう。 ちなみにこれら(pCMV-dR8.74〜psPax2)の違いはpromoterとかの違いで 現在一番titerが高いとされてるのはpsPax2ですし、自分も薦めます。 現在はaddgeneにdepositされてるので誰でも簡単にもらえますよ。

(無題) 削除/引用 No.2654-3 - 2009/01/15 (木) 10:43:25 - ？ 2nd generation packaging plasmid containing gag, pol and rev genes (e.g. pCMV-dR8.91 or pCMVdR8.74psPAX2)*

(無題) 削除/引用 No.2654-2 - 2009/01/15 (木) 10:31:50 - gs86 > あるいはrevタンパクがないとウイルスは複製できないと思っていたのですが、どこか間違っている点があればご指摘ください。 すみません自己訂正です。 ウイルスは複製できない→ウイルスは産生されない の書き間違いです。

レンチウイルスのパッケージング 削除/引用 No.2654-1 - 2009/01/15 (木) 10:23:32 - gs86 レンチウイルスのパッケージングに必要なベクターについてお尋ねします。 通常は目的遺伝子を持ったウイルスベクター以外に、gag,pol,rev,envの4つの遺伝子が必要で、gag/pol, rev, VSVGの3つにパッケージング用ベクターが分けられている（市販のシステム等）と理解していたのですが、RNAi consortiumのプロトコールをみると（http://www.broad.mit.edu/genome_bio/trc/publicProtocols.html）、 パッケージング用にgag/pol, VSVGベクターのみ使用するように書いてあります。 このシステムは一般的な市販のシステムと違うのでしょうか？ あるいはrevタンパクがないとウイルスは複製できないと思っていたのですが、どこか間違っている点があればご指摘ください。

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