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小胞体の蛍光染色 トピック削除
No.2550-TOPIC - 2008/12/24 (水) 02:16:28 - ぞうむし
とある蛋白質を細胞に発現させたら、小胞体?らしき細胞内小器官が抗体染色されました。そこで、この局在がほんとうに小胞体かどうか調べたいのですが、どうしたらよいでしょうか?

小胞体のマーカー分子があれば、それと蛍光二重染色しようと思うのですが、いいマーカーをご存じの方、ご教授よろしくお願いします。細胞内の小胞体をできるだけ全て染色するマーカーがあれば一番なのですが、ある一部のドメインを染色するものでも結構です。また、抗体でなくても、蛍光二重染色できる薬剤であれば、何でもO.Kです。

細胞はMDCK II (イヌ)、3T3 (マウス)を用いています。

よろしくお願いします。
 
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おお、さんありがとうございます 削除/引用
No.2550-7 - 2008/12/24 (水) 16:30:57 - ぞうむし
ざっと調べてみたところ、Chaperone Sampler KitのなかにCalnexinとPDIが入っていました。Organelle Detector Sampler Kitはちょっと範囲が広すぎていまいちでしたが。Golgi Sampler Kitはよさそうですが、これのER版があれば・・・

(無題) 削除/引用
No.2550-6 - 2008/12/24 (水) 16:04:39 - ぞうむし
IFさん、ありがとうございました。

"Organelle Lights ER-GFP"は値段もお手頃だし、使いやすそうでいいですね。しかし、いくら昆虫のウイルスとはいえ、感染性のものを扱うことになるので、法令のチェック(国、研究所双方)と、ラボのコンセンサスが必要になりますね。また、生きている細胞に強制発現させる方法なので、発現させたことによる影響についても慎重に検討する必要もあるようです。まだ文献は少ないようですが、調べてみます。

calnexin, calreticulin 抗体もよさそうですね。検索していたら、コスモバイオニュース50号にアブカム社の細胞内小器官マーカーの特集があり、そこで紹介されていました。アブカム社のものは高いので、安いものを種交差性などを考慮して探してみます。

(無題) 削除/引用
No.2550-5 - 2008/12/24 (水) 13:41:00 - おお
むかし、transduction lab(元BD)がERマーカーの抗体キットをだしてた
と思いましたが、、、、、

(無題) 削除/引用
No.2550-4 - 2008/12/24 (水) 11:33:30 - IF

Organelle Lights ER-GFP

calnexin, calreticulin 抗体で二重染色

はいかが?

ありがとうございます 削除/引用
No.2550-3 - 2008/12/24 (水) 11:12:06 - ぞうむし
ち○こさん、ありがとうございました。

しかし、ER trackerは生細胞の染色用であって、固定後に保持はできないようですね。同じくInvitrogenのSelectFX® Alexa Fluor 488小胞体標識キットが固定後の二重染色にはよさそう。しかし、高い・・・

何か、ほかにもご存じの方、もっと安い方法をご存じの方は、教えてください。

(無題) 削除/引用
No.2550-2 - 2008/12/24 (水) 02:21:20 - ちんこ
ERトラッカー

小胞体の蛍光染色 削除/引用
No.2550-1 - 2008/12/24 (水) 02:16:28 - ぞうむし
とある蛋白質を細胞に発現させたら、小胞体?らしき細胞内小器官が抗体染色されました。そこで、この局在がほんとうに小胞体かどうか調べたいのですが、どうしたらよいでしょうか?

小胞体のマーカー分子があれば、それと蛍光二重染色しようと思うのですが、いいマーカーをご存じの方、ご教授よろしくお願いします。細胞内の小胞体をできるだけ全て染色するマーカーがあれば一番なのですが、ある一部のドメインを染色するものでも結構です。また、抗体でなくても、蛍光二重染色できる薬剤であれば、何でもO.Kです。

細胞はMDCK II (イヌ)、3T3 (マウス)を用いています。

よろしくお願いします。

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