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(無題) 削除/引用 No.252-5 - 2007/09/28 (金) 12:05:22 - si 確実ではないですが、 RTで増幅が確認できる他の培養細胞のタンパクを隣に流してウエスタン。 RNAiでウエスタンのバンドが消えるか。

この場合 削除/引用 No.252-4 - 2007/09/28 (金) 11:58:32 - あああ いくつか可能性があると思いますが、 ・mRNAは発現しているが、RT-PCRがうまくいっていない。 ・mRNAは発現しておらず、抗体で検出したバンドはノンスペである。 ・mRNAは発現しているが、RT-PCRがうまくいっておらず 抗体で検出したバンドもノンスペである？ などなど、、 　それぞれの検出過程で、 ポジ・ネガコンを入れてやるといいと思います。

(無題) 削除/引用 No.252-3 - 2007/09/28 (金) 00:51:08 - えーっと 大腸菌でGST-KITを発現させ、簡単に精製します。 精製したGST-KITとKIT抗体を混ぜてKIT抗体をGST−KITに吸収させます。 吸収した抗体（KITと反応しなかったもの）をWBに使います。 もし、同じところにバンドが出れば、WBで出ていたバンドはKIT以外のものだと考えられます。

簡易的に確認するには 削除/引用 No.252-2 - 2007/09/27 (木) 18:35:08 - 毎日WB 培養細胞でタグ付タンパク質として強制発現させて、ウエスタンでチェックするのはどうでしょうか。（タグの抗体と目的タンパク質の抗体で検出）逆に発現を低下させたときにバンド強度が低下するのを確認する。あとはMSを使ってみるのもいいかもしれません。

RTPCRでないのにウエスタンでバンドでる 削除/引用 No.252-1 - 2007/09/27 (木) 16:51:54 - うえすたんたん 腫瘍の細胞株で実験しています。KITという遺伝子についてRT-PCRでmRNAの発現がないのに、ウエスタンブロットで蛋白発現がでてしまいました。こんなことあるのでしょうか。またウエスタンででたバンドが本当に目的のバンドかどうか確認する方法をご存知でしたら教えてください。

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