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ウエスタンでバンドが白く抜けるのは? トピック削除
No.2486-TOPIC - 2008/12/12 (金) 02:10:14 - ゆり
ウエスタンブロットをやっているのですが、ウエスタン用のマーカー部分と、自分の目的のバンドの部分が白く抜けてしまいます。
 これはどういう原因の時起こるものなのでしょうか?
 ECL Plusでマニュアルどおり5分ECLに浸してやっているのですが、これが長すぎるのでしょうか?バックが相当高くなってしまいます。
 
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(無題) 削除/引用
No.2486-5 - 2008/12/14 (日) 01:00:01 - 名無し
検出の感度と比べて、かなりオーバーローディングと思いますので、1度、1/2, 1/5, 1/10量----という感じで3〜5点くらいで適当に量を変えてアプライしてみていい感じのところを探してからやってみてばどうでしょうか。

おおさんの言うとおりです。 削除/引用
No.2486-4 - 2008/12/12 (金) 18:58:53 - TS
マニュアルのトラブルシューティングに書いてあったような気がしますけど。違う製品だったかな。

(無題) 削除/引用
No.2486-3 - 2008/12/12 (金) 02:20:21 - おお
バックが高いのは抗体濃度やブロッキングなど抗体
処理条件などコントロールするのが一般的です。

あるいは抗体自身をさらに精製するとか、、

(無題) 削除/引用
No.2486-2 - 2008/12/12 (金) 02:17:03 - おお
シグナルが強すぎて、フィルムをコンタクトする時には
基質が消費されている。

抗体が反応しないタンパクが膜上に(比較的多く)吸着
しているので、ほかのエリアよりバックグランドがすくなく
そこだけシグナルが検出されない。

ウエスタンでバンドが白く抜けるのは? 削除/引用
No.2486-1 - 2008/12/12 (金) 02:10:14 - ゆり
ウエスタンブロットをやっているのですが、ウエスタン用のマーカー部分と、自分の目的のバンドの部分が白く抜けてしまいます。
 これはどういう原因の時起こるものなのでしょうか?
 ECL Plusでマニュアルどおり5分ECLに浸してやっているのですが、これが長すぎるのでしょうか?バックが相当高くなってしまいます。

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