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培養液中のNO濃度測定法について トピック削除
No.245-TOPIC - 2007/09/26 (水) 00:51:56 - NOBU
表題通りなのですが、単層培養した細胞の培養液中へのNO産生量を測定したいと思っています。

当研究室では以前Griess reaction法を用いて測定していたようなのですが、それ以外にもっと簡便な測定方法があったら教えていただきたく、トピックを作成させて頂きました。
インターネット調べた限りでは、これといったものがヒットしてきませんでした。
何か簡便な測定法、もしくは測定キットなどご存じでしたら教えてください。よろしくお願いいたします。
 
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ありがとうございました 削除/引用
No.245-5 - 2007/09/28 (金) 07:02:33 - NOBU
NOさん、SNOさん、早速かつ丁寧な回答をありがとうございました

やはり、特殊な器械のおいていない当研究室ではGriess法で行う必要があるようですね。最近ではひょっとしてとても安価簡便な方法があるのではないかと少し期待しておりましたが、「ない」ことが理解できただけでも、本当に助かりました。今後ともよろしくお願いいたします。

NOは不安定です 削除/引用
No.245-4 - 2007/09/27 (木) 22:57:12 - SNO
前の投稿失礼しました。改行キーを押してしまいました。

酸素存在下でNOは安定に存在できません。細胞から産生されたNOは短時間のうちに酸化されNO2やNO3などになってしまいます。NO2やNO3はメディウム中でも比較的安定して存在できます。そのため、NOの産生量を推計する方法として、メディウム中に蓄積したNO2をグリース法を用いて測定することが出来る訳です。NO3はあらかじめ還元してNO2にすることによりグリース法で測定することが出来ます。

NOとして産生されているものを直接測定するためには、DAFやNO電極などを用いることになりますが、あまり実用的ではありません。DAFを用いて細胞内におけるNOを可視化する方法は確立されていますし、NO電極の感度もずいぶんと上がってきていますので細胞からのNO産生を直接的に測定することも可能になってきてはいますが、装置は高価です。それに比較して、一定時間中に産生されたNOの総量を間接的に測定する方法がグリース法や化学発光法を用いた方法ですが、比較的簡便に行えます。化学発光法は特殊な機械が必要なので、吸光度を測定するだけでよいグリース法がもっとも簡便な測定法と言えましょう。
測定感度はあまり高くはありませんが、簡便性を考えると一般の研究室で培養細胞からのNO産生量を推計する方法としてはグリース法が最も簡便といえましょう。

NO産生量と 削除/引用
No.245-3 - 2007/09/27 (木) 22:36:30 - SNO

NOプローブ 削除/引用
No.245-2 - 2007/09/27 (木) 15:06:34 - NO
DAF-2等の蛍光プローブを用いて蛍光検出する方法があります。

http://www.shiyaku-daiichi.jp/products/by_maker/im/im_variety_d.htm

感度は?です。

培養液中のNO濃度測定法について 削除/引用
No.245-1 - 2007/09/26 (水) 00:51:56 - NOBU
表題通りなのですが、単層培養した細胞の培養液中へのNO産生量を測定したいと思っています。

当研究室では以前Griess reaction法を用いて測定していたようなのですが、それ以外にもっと簡便な測定方法があったら教えていただきたく、トピックを作成させて頂きました。
インターネット調べた限りでは、これといったものがヒットしてきませんでした。
何か簡便な測定法、もしくは測定キットなどご存じでしたら教えてください。よろしくお願いいたします。

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