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ROSの測定 トピック削除
No.2369-TOPIC - 2008/11/20 (木) 18:10:30 - ひかりません
HeLa細胞株を薬剤処理し、ROSを測定しようとしています。
ROS測定試薬にはAPFを使用しています。
APFについていた説明書には10uMで30分間インキュベートすると書いてありました。
ですので、薬剤処理したHeLaの培地にAPFを加えて30分放置したのですが、光りません。

問題点がどこにあるかわかりません。
培地にAPFを加えるのではなく、PBSなどにAPFを加えて、30分間インキュベーションすべきなのでしょうか?
細胞を用いて、ROSの測定をしている人がいましたら、アドバイスをよろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2369-3 - 2008/12/16 (火) 10:30:49 - たまたま見ました
もう解決されましたでしょうか?

私は、APFおよびHPFを用いて、他の細胞(単離したrat pancreatic stellate cell)をもちいて検討をいたしましたが、蛍光を発していましたよ。
ちょっと私の実験とは刺激を加えるやり方が違うかもしれませんが・・・
参考になれば幸いです。

1.0.1%FBSにて24時間培養。
2.0.1%FBSにAPFを混じたもので10分前培養(プロトコールどおり)。
3.それに刺激を加え、蛍光顕微鏡にて観察。

必要なら論文のPDFを送ります。

追伸、 削除/引用
No.2369-2 - 2008/11/21 (金) 12:04:56 - ひかりません
測定は、通常の蛍光顕微鏡を用いて行っています。
コンフォーカル顕微鏡ではありません。

ROSの測定 削除/引用
No.2369-1 - 2008/11/20 (木) 18:10:30 - ひかりません
HeLa細胞株を薬剤処理し、ROSを測定しようとしています。
ROS測定試薬にはAPFを使用しています。
APFについていた説明書には10uMで30分間インキュベートすると書いてありました。
ですので、薬剤処理したHeLaの培地にAPFを加えて30分放置したのですが、光りません。

問題点がどこにあるかわかりません。
培地にAPFを加えるのではなく、PBSなどにAPFを加えて、30分間インキュベーションすべきなのでしょうか?
細胞を用いて、ROSの測定をしている人がいましたら、アドバイスをよろしくお願いします。

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