Bio Technical フォーラム

  • 書き込みがかなり増えてしまいサーバーの負荷が大きくなったので、新しいBioTechnicalフォーラムに移行してください。
  • 新しいトピックは新フォーラムでのみ立ち上げ可能です。レスは2009年2月15日までつけられますが、その後は、つけられません。

トピック一覧　|　研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム　|　このフォーラム（readのみ）　|　ひとつ前のフォーラム（readのみ）

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

PVDF membraneのamido black染色 トピック削除
No.200-TOPIC - 2007/09/15 (土) 05:24:22 - membrane staining
Western blotの写真撮影後（きれいに目的のバンドはでています）、membrane(PVDF,protein用）をamido black染色したのですが、最後の洗い後もバックグランドが高く、蛋白のバンドも通常より薄く、もしくはなく、困っています。２回連続で起こってます。
同じ、membrane、試薬を使用している他の者はうまくバンドを検出できています。
蛋白アプライ量；２５ug
プロトコール
１：膜をPBSで１回洗い、２：restore western blot stripping buffer5mlで１５分、３：５分PBS洗い、４：dH2Oで１回リンス、５：Amido Black３分染色、５：５０％Methanol,１０％Acedic Acidで洗い

何が原因なのでしょうか？
　
- このトピックにメッセージを投稿する -



全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用
No.200-3 - 2007/09/18 (火) 08:55:36 - モノクロ
度々すいません。以前のＷ．Ｂ．ではレインボーマーカーを使用しておらず、転写後マーカー部分のみ切り出し、直接染色してました。ブロッキングしてしまうとタンパクが前面に塗膜され、ストリッピングしても完全にタンパクが剥がれない可能性はないでしょうか？

(無題) 削除/引用
No.200-2 - 2007/09/18 (火) 08:51:32 - モノクロ
染色3分は長すぎませんか？30秒程度で脱色に移すと染まりすぎないと思います。

PVDF membraneのamido black染色 削除/引用
No.200-1 - 2007/09/15 (土) 05:24:22 - membrane staining
Western blotの写真撮影後（きれいに目的のバンドはでています）、membrane(PVDF,protein用）をamido black染色したのですが、最後の洗い後もバックグランドが高く、蛋白のバンドも通常より薄く、もしくはなく、困っています。２回連続で起こってます。
同じ、membrane、試薬を使用している他の者はうまくバンドを検出できています。
蛋白アプライ量；２５ug
プロトコール
１：膜をPBSで１回洗い、２：restore western blot stripping buffer5mlで１５分、３：５分PBS洗い、４：dH2Oで１回リンス、５：Amido Black３分染色、５：５０％Methanol,１０％Acedic Acidで洗い

何が原因なのでしょうか？
全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を