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(無題) 削除/引用 No.19-5 - 2007/08/09 (木) 19:35:01 - 名無し TX100の液と硫安混ぜて一晩置いて同じのが出たらその白いのはTX100だと思います。 TX100の代わりに、そういう風にならないような界面活性剤を使うのがいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.19-4 - 2007/08/03 (金) 20:09:56 - 酒多飲 高マグネシウムで溶出したサンプルで、 硫酸マグネシウムが析出したとかは、ないですよね。 いや、硫酸ナトリウムの方が溶けにくいから、 高NaClで溶出のほうが沈殿は出やすいかも？ 2% TNX のサンプルを以前硫安塩析したときには、 なぜか緑色の層ができましたが、沈殿はしていませんでした。 脂質の多いサンプルだったからかもしれません。 沈殿するかどうかはともかく、TNX は塩析されると思いますが、 0.1% なら白濁したりはしないと思いますよ。

訂正と補足 削除/引用 No.19-3 - 2007/08/03 (金) 19:53:01 - Winter8 >低濃度のTritonX-100が硫安沈殿に影響を与えるのは考えにくいのでは？ >試しに遠心でわけて、SDS-PAGEをしてみてはいかがでしょうか？ Tritonが硫安で沈殿することは考えられないし、Tritonの有無で硫安沈殿の結果が劇的に変わるとも考えにくい。ただ、Tritonが無いと不安定になって凝集するということはあるかもしれない。 硫安沈殿を上清と沈殿に分けて、目的タンパク質がどこにあるかを確認することが重要です。 >透析をすると、サンプル中のTritonX-100の濃度は高くなります。 >限外ろ過でも分離が難しいので、ゲルろ過などで除いています。 3000MWぐらいのサイズではTritonは通りません。結果的にTritonの濃度が高くなることも多々あります。

(無題) 削除/引用 No.19-2 - 2007/08/01 (水) 13:45:16 - Winter8 低濃度のTritonX-100が硫安沈殿に影響を与えるのは考えにくいのでは？ 試しに遠心でわけて、SDS-PAGEをしてみてはいかがでしょうか？ 透析をすると、サンプル中のTritonX-100の濃度は高くなります。 限外ろ過でも分離が難しいので、ゲルろ過などで除いています。

硫安沈殿 削除/引用 No.19-1 - 2007/08/01 (水) 10:38:41 - みた アフィニティー精製してきたサンプル中に、0.1%TritonX-100が入っているんですが、 そのサンプルをそのまま硫安沈殿すると白濁してしまいます。とりあえずover nightで置いておくと、かなりの量の固まりが見えます。サンプルのタンパク濃度から考えると、タンパクが沈殿してきた物とは考えにくいです。 0.1%TritonX-100のサンプルは、硫安沈殿に供せないものなのでしょうか、 仮に供せてたとして、透析後のサンプル中のTritonX-100の濃度が高くなったりしてしまうのでしょうか？

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