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部位特異的変異の数について トピック削除
No.945-TOPIC - 2008/04/10 (木) 11:39:59 - ima
stratagene社の site directed mutagenesis kitの原理に基づいて今までに1アミノ酸置換の変異体を数多く作製してきたんですが、隣接したアミノ酸にも変異を入れたいと思っています。一度にどのくらいの数の塩基までなら置換することが出来るのでしょうか?
 
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No.945-6 - 2008/04/15 (火) 07:40:45 - yt
Sorry, I noticed my point was not clear.

I wanted to say "as such long insertions can be made with this technique, you would be able to make multiple substitutions over rather wide ranges".

(無題) 削除/引用
No.945-5 - 2008/04/15 (火) 03:04:32 - yt
15残基のタグ(ヌクレオチドでは45塩基)を一度に導入するのをやったことがあります。
成功率は配列にもよるのでしょうが、そんなに極端に悪くなかったように記憶してます。

(無題) 削除/引用
No.945-4 - 2008/04/14 (月) 19:55:58 - カナマイシン
私はXYXXYXという配列のXすべて(計4個)を1ステップで変異させました。
いちおうXYYXYYも準備していたのですが不要でした。
配列は2クローン読んで1勝1敗。なので確率については確かなことは言えません。

(無題) 削除/引用
No.945-3 - 2008/04/14 (月) 18:41:16 - A
この辺りはここで聞くよりもまずstratagene社に確認を取られるほうが
確実では?スレを立てた時の書き方からしてstratagene社のキットを
買って使っていない様に感じますがその辺りは伏せて、「部位特異的変異
を使った実験を計画していてstratagene社のキットを使えばどれぐらいの
変異を入れることが出来るのか?」とテクニカルサポートに聞いてみれば
imaさんほしい情報を得ることが出来ると思います。

(無題) 削除/引用
No.945-2 - 2008/04/14 (月) 10:21:16 - つん
間に1-3塩基をはさんで、一度に3塩基を置換したことがあります。
シーケンスを確認したところ、かなりの高確率で3塩基とも置換されていましたよ。

部位特異的変異の数について 削除/引用
No.945-1 - 2008/04/10 (木) 11:39:59 - ima
stratagene社の site directed mutagenesis kitの原理に基づいて今までに1アミノ酸置換の変異体を数多く作製してきたんですが、隣接したアミノ酸にも変異を入れたいと思っています。一度にどのくらいの数の塩基までなら置換することが出来るのでしょうか?

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