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SHSY5YにsiRNAを導入 トピック削除
No.938-TOPIC - 2008/04/09 (水) 08:59:28 - おお
どなたかSHSY5YにsiRNAを導入している方いませんでしょうか?差し支えなければ条件とか教えて欲しく思っております。
 
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No.938-5 - 2008/04/14 (月) 13:50:22 - おお
>[Re:4] Caspaseさんは書きました :
> たしかSHSY5YはSKNSHからの発生株だったように記憶しています。
あ、知りませんでした。勉強部足です、、いい情報ありがとうございました。

> siPORTの組成は当然分らないのですがLF2000あたりで一度お試しになられてはいかがでしょうか。

そうですね。いまを含め手元にあるものでちょっとやってみることにします。文献的にはリフェクタミンとPLUSを使ったもの、オリゴフェクタミン、エレクトロポレーションなどが見つかってます。

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No.938-4 - 2008/04/13 (日) 13:32:34 - Caspase
たしかSHSY5YはSKNSHからの発生株だったように記憶しています。
同じ条件でSHEP細胞も同様にトランスフェクションしたのですが
SHEPはほとんどKD効果が認められなかったように記憶しています(当然これら3種の細胞で内因性の目的遺伝子が十分に発現されているのは確認しています)。
導入効率が悪いかどうかの検討は行いませんでしたが、同時に行ったSKNSHで結果が出ていますので、おそらく導入がSHEPで悪かったためではないかと考えました。SHSY5Yも同時に行ったはずですが結構前に行った実験なので(Ambionが買収される前)記憶が定かではありません。SHSY5YよりSKNSHを選択したのは比較的後者の方が接着性が高かったので扱いやすかったためです。
siPORTの組成は当然分らないのですがLF2000あたりで一度お試しになられてはいかがでしょうか。

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No.938-3 - 2008/04/10 (木) 22:52:47 - おお
Caspaseサン、ありがとうございました。Ambionのやつは手元にないですねぇ、、、
ちょっと考えてみます。

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No.938-2 - 2008/04/10 (木) 11:53:45 - Caspase
SK-N-SH細胞にAmbionのsiPORTNeo-FXで導入した経験はあります。
導入2日後、endopointPCRで目的遺伝子の80%位のKDを確認しました。
添付書類どおりのプロトコールでした。
ご参考になりましたら幸いです。

SHSY5YにsiRNAを導入 削除/引用
No.938-1 - 2008/04/09 (水) 08:59:28 - おお
どなたかSHSY5YにsiRNAを導入している方いませんでしょうか?差し支えなければ条件とか教えて欲しく思っております。

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