全7件 ( 1 〜 7 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

レポータープラスミドの量 削除/引用 No.935-7 - 2008/04/11 (金) 00:26:56 - reporter タイムコースについては検討し、最適と思われる条件で実験を行っています。 プラスミド量を変えてみても効果がなければ、半減期の短いlucを試してみたいと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.935-6 - 2008/04/10 (木) 16:57:12 - BBB TNF +/-で１０倍以上変わるはずならまだしも、 数倍ならば、もともとのバックグラウンドがあると 上昇が見難いかもしれません。 luc2CPのように、 短寿命のluciferaseを使ってタイムコースを みるというのはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.935-5 - 2008/04/10 (木) 11:38:01 - Caspase タイムコースは取られておられるでしょうか？ NF-kBのように短時間に一過性に活性が上がり、速やかに消失する場合もあるかと思うのですが...

レポータープラスミドの量 削除/引用 No.935-4 - 2008/04/09 (水) 23:18:34 - reporter 説明不足の質問にも関わらずアドバイスを頂き、ありがとうございます。 あるプロモーターの活性を調べています。 実際には４倍程度の活性化は見られてるのですが、もっと上がっていいはずだ。と周りから指摘を受けた際、プラスミドの量の問題では？ということになり、増やすのか減らすのかを悩んでいました。 おおさんのアドバイスにあるように減らす方向で試してみたいと思います。 （細胞のレスポンスは刺激後のNF-kBの核移行で、トランスフェクション効率に関してはインターナルコントロールphRL-TKの活性で見る限り問題ありませんでした。）

(無題) 削除/引用 No.935-3 - 2008/04/09 (水) 11:48:32 - おお プロモーターのアッセイのことでしょうか?NFkBのコンセンサスとか使っているのでしょうか? 実験の系に問題がないならば、個人的には少ない方がいいと思います。プロモーターの活性に関与するたんぱく質が細胞内で限られた状態でプラスミドばっかり過剰に入ってもリスポンスできないレポーターを増やすだけのような気がするからです。 プラスミドの量のまえに、細胞のリスポンスが鈍っていないかとかトランスフェクションの効率とかの問題はないとお考えでしょうか?

(無題) 削除/引用 No.935-2 - 2008/04/08 (火) 21:31:05 - ~ 何も参考になる量が無いのでしたら、3.3倍位ごとに希釈して、計100倍位の範囲を見てみてはいかがでしょうか。 同じ細胞系で、何か論文になっているポジコンは無いのでしょうか？

レポータープラスミドの量 削除/引用 No.935-1 - 2008/04/08 (火) 21:28:20 - reporter レポーターアッセイでTNF-α刺激時（5ng/ml）の活性化が予想されるほど見られません。 TNF濃度を上げるなど色々な対処法があると思いますが、今回はレポータープラスミドの導入量を変えようと思います。 レポータープラスミドの量が少なくて刺激に反応できてないと考えて導入量を増やすのか、basalが高いために刺激による効果が見えにくいと考えて減らすのがいいのか、迷っております。 みなさんのご意見を聞かせて頂ければと思います。

全7件 ( 1 〜 7 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---