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(無題) 削除/引用 No.890-5 - 2008/03/31 (月) 12:02:16 - ~ >鏡検で細胞は育ってたのですが沈殿せず、うまく継代できませんでした。 遠心後に沈殿が見られなかったのに、その時点で何も対応しなかったのですか？ それとも、沈殿があるかどうか確認せず、撒いた後で細胞がいないことに気づいたのですか？ 1.回収した後のディッシュに残っていないか 2.遠心後にチューブに沈殿が出来ているか 3.上清を除いた後にも沈殿が残っているか 4.撒いたディッシュに、細胞がちゃんといるか の4点位を確認すれば、どのステップで細胞を失ったのか分かり、 そのステップからすぐにやり直すことが出来ると思います。 なんとなく、３の上清を捨てる時に、一緒に沈殿ごと捨てているのではないかという気がするのですが… または、遠心機の速度計がlowになっていて、ぜんぜん落ちない速度で回してませんか？

(無題) 削除/引用 No.890-4 - 2008/03/30 (日) 00:49:05 - りょう その細胞はかなり接着能が強かった記憶がありますが、スクレイパーで本当にはがせていますか？しっかり顕微鏡で確認して下さい。

(無題) 削除/引用 No.890-3 - 2008/03/29 (土) 21:44:54 - ひまわり 遠心管を先の細いものにすると細胞が回収しやすいですよ。 50mlの遠心管を使っているのであれば、15mlの先の細い遠心管に変えてみるとか、あとは遠心時間を10minにするとか、色々方法があると思います。 私はフラスコ使用時はscraperじゃなくてコラゲナーゼではがし、細胞を回収した後、注射器を使って細胞をばらばらにしてから遠心しています。

(無題) 削除/引用 No.890-2 - 2008/03/29 (土) 18:19:00 - a 細胞が団子状態だと浮力で沈まないこともあります その時は、ピペッティングで細胞をばらしてから遠心し直せば回収できます。 必ず目視で細胞が落ちたか確認すればミスは防げます。

継代で細胞がなくなってしまいます 削除/引用 No.890-1 - 2008/03/29 (土) 18:11:55 - いるか こんにちは。今年実験を始めたものです。マウスMφ細胞株のRAW264.7を使ってます。継代を3日おきにしていて、scraperで剥がし、1500回転5分RTで遠沈して上清を捨て、新しいDMEM＋FCS培地を加えて培養する、という方法をとってます。 これまでうまくいってましたが、先日、鏡検で細胞は育ってたのですが沈殿せず、うまく継代できませんでした。先輩に聞き、新しい細胞を起こして、75cmボトルで底面いっぱいに固着したので今日同じことをしたらやはり全然沈殿しませんでした。どうして？？前回の細胞との共通点は新しく起こしてあまり日にちがたっていないもの、ですが。そういう細胞だと若干軽いのですか？ なんだかとても変な質問ですみません。でも、よくわからなくて悩んでます。

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