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グルタルアルデヒド 削除/引用 No.886-7 - 2008/03/31 (月) 16:29:03 - M 学生実習で使ったプロトコールでは、0.2%グルタルアルデヒド固定をしていました。乾燥はさせません。 ５分位固定して水洗、ギムザ液をディッシュにたらして１−５分（神経は１分）、水洗後カバーガラスを掛けて鏡検。

(無題) 削除/引用 No.886-6 - 2008/03/29 (土) 15:41:00 - zz dishをPBSで一回洗って、SDS-PAGEの脱色液（MeOH-酢酸-DW=25:8:65、室温で可）で5-10分程度固定します。その後、MeOHで置換して乾燥することができます。細胞の剥離は極めて低く、光学顕微鏡程度の形態保持はできているかと思います。オルガネラの形態や更に微細な形態に関しては、保証できませんし、あいにく参考文献を見つけることはできません。

(無題) 削除/引用 No.886-5 - 2008/03/29 (土) 12:06:42 - 実経験なし たぶん、固定前に乾燥させると、細胞は縮むと思います。 おそらく、固定前に乾燥させるプロトコールは、血液標本のものだと思います。この場合、目的は血球のカウントなので、形態の保持は関係ありません。血球の種類は、染色された色で区別されると思います。 培養細胞の形態保持が必須であるのであれば、固定を先にする必要があると思います。 申し訳ありませんが、実際に、培養細胞も血液細胞もギムザで染色したことはないので、固定後の乾燥の必要性に関してはわかりません。

(無題) 削除/引用 No.886-4 - 2008/03/28 (金) 13:37:36 - Mend ありがとうございます。 今の方法で染色すると、一つ一つの細胞が縮んだような感じになって、 核だけ染まった不整形の粒がたくさん見えるだけという風です。 細胞質とバックグラウンドの境界も不鮮明で、 細胞カウントはまだしも、写真を共覧など論外な写真となっています。 固定後の乾燥が不要、ということでしょうか？？

(無題) 削除/引用 No.886-3 - 2008/03/28 (金) 13:31:19 - おお あ、メタノールの前は乾燥させてません。

(無題) 削除/引用 No.886-2 - 2008/03/28 (金) 13:29:29 - おお 私はメタノールを加えて固定後、それを除き直ぐに染色液を加えてました。何が(どういう所が)どの様に綺麗に染まらないのかとか詳しく書いた方がアドバイスを受けやすいのでは、、

培養細胞のギムザ染色のコツ 削除/引用 No.886-1 - 2008/03/28 (金) 11:44:50 - Mend 培養細胞のギムザ染色を行っていますが、 なかなか綺麗な染色を行うことができません。 現在は、培養液除去→PBS洗浄→すぐにメタノールで90秒固定→ 　PBS洗浄→完全に乾燥→PBSで10倍希釈したギムザ、37度60分→洗浄 でやっています。 多くの参考資料を見ると、 「メタノール固定前に乾燥させる」との記載と、「なるべく乾燥させない」 と両方の記載があり、羊土社の文献にはエタノール固定なる方法が乗っています。 綺麗に培養細胞をギムザで染める際のコツはありますでしょうか？ またメタノール固定前の乾燥の是非はどうなんでしょう？ 教えてください。

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