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ありがとうございます 削除/引用 No.868-3 - 2008/03/23 (日) 21:04:22 - TO 通りすがりさん、 非常に有用なアドバイスありがとうございます。 ２−３日目に回収できるような実験計画で進めたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.868-2 - 2008/03/23 (日) 19:40:38 - 通りすがり ほとんどの培養細胞の場合、一過性で過剰発現させたときは 発現させたいタンパクの種類、vectorのpromoterのタイプと 細胞の種類によりますが、ほとんどの場合 ２日-４日目がピークでそれ以降は減少し、 selectionをかけていたりepisomeやvirusの形で導入しているので 無い限りは、１週間もたってると発現している細胞そのものが少なくなり、 さらに個々の細胞での発現レベルも減少していき、 少なくともwesternなどのレベルで検出するのが難しいレベルまで落ちます。 目的がIPなどであれば2,3日目あたりでサンプルを回収するのが 普通ですので、回収したい日の2,3日前にtransfectionするような 計画を立てればよいと思います。

一過性過剰発現の時間 削除/引用 No.868-1 - 2008/03/23 (日) 19:29:13 - TO 経験のある人がいたら教えていただきたいのですが、 ラット細胞にプラスミドのトランスフェクションでタンパク質を一過性過剰発現・IPしようと考えています。ふと思ったのですが、一過性過剰発現はどのくらいの期間続くのでしょうか？最大発現はトランスフェクション後１−３日ぐらいだと思うのですが、１週間後とかでも発現自体は続いているものなのでしょうか？実験計画を立てるのに参考にしたいと思っています。

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