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No.863-TOPIC - 2008/03/21 (金) 19:51:26 - 初心者
最近、分子生物学の実験をはじめたものです。リポフェクトアミン2000を使いGFP等をHEK等に導入しているのですが、導入効率が悪いです。そもそもHEKは分裂するから、結果的には効率が下がって当然なのかな?と思っていたのですが、インビトロジェンのHPをみると導入効率は100%近いです。皆様方はどのくらいの導入効率を達成されていますか?何かコツがあるのでしょうか?
 
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No.863-3 - 2008/03/22 (土) 14:46:48 - おお
100%まで行かないにしても可也入っているなという感触はありますね。DNAは何かトランスフェクション用に使えるグレードのDNAが精製できるキットを使ってますか?それと、DNAにニックとか入ったりしていたら効率は悪くなると思います。
もう一つはHEKは非常に変わりやすい細胞ですので、もしいま培養しているものが可也歴史があるものであれば、なるべくオリジナルに近いストックを起こしなおしたほうがいいかもしれませんよ。無理な場合は買い直すか、周りのラボで持っているところ(なるべくならリポフェクトアミン2000を使っていてよく入っているもの)から分けてもらうか、シングルクローンを拾って、うまく入るものを見つけるなどの方法が取れると思いますが、その前に細胞のせいなのか、手技的な問題なのか決めないといけませんね。

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No.863-2 - 2008/03/21 (金) 20:24:10 - a
HEKなどは8割以上は入りますよ

DNAの精製やトランスフェクションの条件などを書いてください

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No.863-1 - 2008/03/21 (金) 19:51:26 - 初心者
最近、分子生物学の実験をはじめたものです。リポフェクトアミン2000を使いGFP等をHEK等に導入しているのですが、導入効率が悪いです。そもそもHEKは分裂するから、結果的には効率が下がって当然なのかな?と思っていたのですが、インビトロジェンのHPをみると導入効率は100%近いです。皆様方はどのくらいの導入効率を達成されていますか?何かコツがあるのでしょうか?

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