全8件 ( 1 〜 8 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.857-8 - 2008/03/24 (月) 21:59:09 - 名無し イミダゾールは金属をくっつけるのでは？(金属イオンをくっつける性質があるHistidineはイミダゾールもってるし、Histidine-tagのNiカラム精製の原理からもわかるように。)だからBCA法はたしか銅イオンが関わる反応だったはずなので、これはやっぱ妨害するようにおもいます。

(無題) 削除/引用 No.857-7 - 2008/03/24 (月) 00:08:38 - K Eire様 とても勉強になりました。本当にありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.857-6 - 2008/03/21 (金) 11:22:32 - L >Eire様 なるほど、ストックの製品があるわけですね。情報ありがとうございます それならば、分解の件については、先方の勘違いのようですね。

(無題) 削除/引用 No.857-5 - 2008/03/21 (金) 08:39:36 - Eire Sigma が販売している Bradford reagent の説明書に記載されている compatibility sheet によると、Imidazole pH7.0 で 200 mM とあります。ですので溶出時のイミダゾール濃度が 200 mM 以下であれば問題なさそうです。それ以上（250 mM が His-tag タンパクの溶出によく使われる濃度だと思います）の場合は溶出サンプルを希釈する必要がありそうです。 また、 L さんがお書きになった > そういえば、イミダゾールは水溶液中ですぐに分解するといわれたことがありますが、実際どうな> んでしょうか？ ですが、Fluka が 1M 水溶液を売っているので、水溶液中ですぐに分解とということはなさそうです。 では、お役に立てば幸いです。

ありがとうございます 削除/引用 No.857-4 - 2008/03/20 (木) 23:20:04 - K 皆様 ご教授いただきありがとうございました。勉強になります。 Bradford法によるタンパク定量は今回のイミダゾール溶液でも適応できるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.857-3 - 2008/03/20 (木) 15:28:24 - L His-Tag融合タンパク質の精製でしょうか？ イミダゾールはそのまま溶かすと、pH9程度のアルカリ性を示します。 そのキットでは、アルカリが妨害物質となっているようなので、 透析やゲルろ過などでバッファー置換をする必要があるかと思います。 イミダゾールのストックを作って、これを用いるバッファーのpHに合わせておき、 使うときに適当量バッファーに加えれば、イミダゾールによる妨害はなくなると思います。 そういえば、イミダゾールは水溶液中ですぐに分解するといわれたことがありますが、実際どうなんでしょうか？ 事実だとすれば、上記の方法は使えませんねぇ。

(無題) 削除/引用 No.857-2 - 2008/03/20 (木) 14:18:08 - a http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/men/article/BCAReduce.htm これは、BCA Reducing Agent Compatibleのデータシートですが、 希釈してimidazole濃度を低くすれば良いのでは？

イミダゾール 削除/引用 No.857-1 - 2008/03/20 (木) 13:06:10 - K タンパク定量（BCA法）を行なってみましたが、タンパク精製の過程でイミダゾールが入ったタンパク溶液は、入れた瞬間に青色に変わりました（普通は紫色に変わるのですが）。このタンパク溶液は、BCA法には適さないのでしょうか？どなたか教えてください。

全8件 ( 1 〜 8 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---