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シークエンスの違いについて
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No.848-TOPIC - 2008/03/19 (水) 10:35:01 -
RNA
お世話になります。GENBANKのデーターベースをもとに設計したプライマーを用いてある組織よりのPCR産物をシークエンスしました。
データーベースは腎をもとにしておりましたが私が行った脳よりのシークエンスとは塩基配列が100bpで2箇所違いがありました。
単なるリーディングミスではないようでした(N=2で行っている)
これくらいの差は臓器が異なれば許容範囲なのでしょうか?
教えてください
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No.848-4 - 2008/03/19 (水) 17:56:18 - ぽー
DNA(もしくはcDNA)を抽出したのは人の組織ですか?
それともマウスなどの他の生物ですか?
人サンプルならみなさんも言われているようにSNPの可能性が高いと思います。
マウスなどの他の生物だと系統が違えば配列が違うことは多々あるので、系統間の差というのも考慮に入れたほうがいいかもしれません。
Re:
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No.848-3 - 2008/03/19 (水) 17:36:22 - AC
こんにちは。DNAさんの回答にあるように、まずSNPを疑います。自分ならUCSCのサイトに配列を投げて、すでに登録されているSNPかどうか確認して、もうしそうならばひとまず安心、で、もしその配列がアミノ酸コード領域で、そのSNPによってアミノ酸配列が変わらない(synonymous change)なら更に安心します。もし、アミノ酸置換を伴う変異なら、ちょっと気持ち悪いので、他の個体の臓器が入手可であれば、それからの増幅産物を見てみますかね。
「臓器による差」というよりは、個体による変異(SNP)だと思います。
http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgBlat?command=start
(SNPを表示するかどうかは、オプションから選べます)
(無題)
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No.848-2 - 2008/03/19 (水) 11:00:56 - DNA
DNAレベルで再編成のある免疫グロブリンや、mRNAレベルでエディティングを受けるアポリポタンパク質のような例外を除いて、臓器によってmRNAの配列が違うということはありません。
ご覧になっている配列の差は、GenBankの配列情報にエラーがあるのでなければ、個体間のポリモルフィズムだと思われます。
シークエンスの違いについて
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No.848-1 - 2008/03/19 (水) 10:35:01 -
RNA
お世話になります。GENBANKのデーターベースをもとに設計したプライマーを用いてある組織よりのPCR産物をシークエンスしました。
データーベースは腎をもとにしておりましたが私が行った脳よりのシークエンスとは塩基配列が100bpで2箇所違いがありました。
単なるリーディングミスではないようでした(N=2で行っている)
これくらいの差は臓器が異なれば許容範囲なのでしょうか?
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