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(無題) 削除/引用 No.831-8 - 2008/03/19 (水) 23:46:39 - Z MYさん、とおりすがりさん、atsさん情報有難うございます。 >[Re:7] MYさんは書きました : > ナカライの人にロシュのAnti-His（2）を薦められました・・・。 >[Re:6] とおりすがりさんは書きました : > WBならCLONTECH, ROCHE のものが良いと思います。 >[Re:5] atsさんは書きました : > 後発のロッシュ社製も良いものらしいです。 皆さんのお話を合わせるとCLONTECHまたはROCHE のAnti-His抗体を 試してみるのがよさそうですね。ナカライの人がROCHEの抗体を 薦めていると言う事はナカライの抗体は除外のようです。

(無題) 削除/引用 No.831-7 - 2008/03/19 (水) 00:13:51 - MY ナカライの人にロシュのAnti-His（2）を薦められました・・・。

(無題) 削除/引用 No.831-6 - 2008/03/18 (火) 22:44:56 - とおりすがり WBならCLONTECH, ROCHE のものが良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.831-5 - 2008/03/17 (月) 19:07:33 - ats 後発のロッシュ社製も良いものらしいです。

(無題) 削除/引用 No.831-4 - 2008/03/17 (月) 18:19:55 - Z 情報頂き有難うございます。 りょう様 > ナカライ社製で綺麗に検出できます。 > westernでしか試したことないですが。 次回新しい抗体を買う時にナカライ社に検出感度について聞いてみて 購入を検討してみます。 おお様 > 私はAnti-Hisの検出感度は大抵のものはそんなに高くないと感じています。キアーゲンは何種類か抗体を出してますが、検出感度を明記してますのであなたの必要な検出感度と比べて有用かどうか判断できると思います。あとはポリクロの方が感度が高い場合が多いのではと思います。 > > わたしは検出感度に不安があるのでなるべくAnti-Hisは避けてますので的確なものを示せませんが、おもちの抗体でバックグランドなどがクリーンであれば、3ー5倍濃い濃度でやってみるのもてかと思います。 > １度昔のオンコジーン社のクローンAbー1の抗体(anti-His)を使ったことがありましたが、濃度を少し下げると、シグナルが全くでない事がありましたので、物によっては特異的であってもそんなに相互作用は強くないんだなぁと思ったことがあります。洗いの溶液の量や時間もほかの抗体にくらべて少し少なめにするのも方法かもしれませんね。 おおさんがおっしゃるように私も通常の抗体に比べ市販のAnti-Hisの検出 感度が低いように感じています。CBBで10ngがぎりぎり検出できますから それ前後の検出感度が得られればなあと思っています。今使っている条件 では100ng前後が検出限界のようです。 私は結構強めにWashするほうで今のところバックグランドはほぼ全くと いっていいほど出ていません。ポジコンのシグナルは安定しています。 同僚は私ほど強くWashしていませんが時々ポジコンで期待したとおりの シグナルが得られないようです。ですからWashに関してはそれほど問題が ないような印象です。抗体濃度に関しては今まで振ったことがないので 近々幾つかの条件を振って確認してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.831-3 - 2008/03/17 (月) 04:04:06 - おお 私はAnti-Hisの検出感度は大抵のものはそんなに高くないと感じています。キアーゲンは何種類か抗体を出してますが、検出感度を明記してますのであなたの必要な検出感度と比べて有用かどうか判断できると思います。あとはポリクロの方が感度が高い場合が多いのではと思います。 わたしは検出感度に不安があるのでなるべくAnti-Hisは避けてますので的確なものを示せませんが、おもちの抗体でバックグランドなどがクリーンであれば、3ー5倍濃い濃度でやってみるのもてかと思います。 １度昔のオンコジーン社のクローンAbー1の抗体(anti-His)を使ったことがありましたが、濃度を少し下げると、シグナルが全くでない事がありましたので、物によっては特異的であってもそんなに相互作用は強くないんだなぁと思ったことがあります。洗いの溶液の量や時間もほかの抗体にくらべて少し少なめにするのも方法かもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.831-2 - 2008/03/16 (日) 21:30:46 - りょう ナカライ社製で綺麗に検出できます。 westernでしか試したことないですが。

Anti-His抗体 削除/引用 No.831-1 - 2008/03/16 (日) 19:37:44 - Z 現在C末に6xHisをつけたリコンビナント蛋白質の発現を行なっています。 蛋白質をAnti-His抗体で検出しているのですがWBを行なった際の検出感度 が予想していたよりも低く困っています。皆さんがお使いのメーカーから 発売されているAnti-His抗体で検出感度の良いものがありましたら教えて いただけませんか？ 現在の研究室で使っているのはSIGMAのmouse anti-His抗体とInvitrogen のanti-His-HRP抗体です。

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