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(無題) 削除/引用 No.817-6 - 2008/03/16 (日) 19:42:27 - A > そういえばTrisは温度によってもほかのバッファーよりpHが大きく >シフトします。参考までに。 物理化学的な実験によるとTrisは温度が１度上がるとpHが0.032下がります。 室温と４度では結構変わりますよね。

(無題) 削除/引用 No.817-5 - 2008/03/14 (金) 01:17:34 - J ダルベッコのPBSの10Xストックみたいですね。 たぶん、その組成で作ってpHをあわせないでメスアップして、希釈するとpHが7.4になってるかと思います。 違ってたら申し訳ないです。

(無題) 削除/引用 No.817-4 - 2008/03/13 (木) 18:13:36 - おお 先ず、作り方に間違えがあります。 pHはNaOHで合わせると全体の塩濃度が変わってきます。燐酸バッファーはpHを厳密に合わせる必要がない場合はpHを合わせずに調整します。厳密に合わせる必要がある場合は、等モルの１カリと2ナトを用意して、その混合比でpHを合わせていきます(場合によっては1カリ、2カリのコンビネーションとかもあり得ますが)。 もう一つはバッファーはやはり濃度が違うとpHが変わってきます。 PBSのレシピについて詳しく調べたわけでないので、1xの時ちょうどいいpHになるように作られているか分からないですが、最初1xのレシピで作られていたものを、成分を10倍の作りおきをだれかが考え出したお思えば、10xのpHは当てにならないと思います。 ただし、たいていのほかのバッファーは1Mとか作って、薄めるわけですがこれは厳密な方法ではありません。しかし、毎回同様に1Mから作ることにより、再現性は確保できるわけです。バッファーの作り方は、あなたの実験系がpHがどのように重要かを考えて決めるべきだと思います。 そういえばTrisは温度によってもほかのバッファーよりpHが大きくシフトします。参考までに。

(無題) 削除/引用 No.817-3 - 2008/03/13 (木) 13:45:16 - h 原理はわかりませんがうちのプロトコールでは10xをpH6.7で作っていました。 これで1xにするとpH7.2-7.4でイイ感じになります

(無題) 削除/引用 No.817-2 - 2008/03/13 (木) 13:11:09 - 化学平衡 恐らく化学平衡で説明できると思います。 本来、Na2HPO4やKH2PO4はほぼ完全に電離すると考えますが、10xPBSという高塩濃度条件下では、電離度が低下していると考えられます。 これが、1xPBSになって塩濃度（Na+, K+）が薄くなると電離度が上昇し、ほぼ完全に電離するようになります。 このことが、リン酸の電離平衡に及ぼす影響を考えてみると、H2PO4(-)とHPO4(2-)がH3PO4に比べて相対的に増加することになり、特に二価のイオンであるHPO4(2-)の増加が顕著となるため、それに伴って水素イオンは減少します。 H3PO4　⇔　H2PO4(-) + H(+) H2PO4(-)　⇔　HPO4(2-) + H(+) の平衡が左による訳です。 相当大雑把な考え方ですので、誤りがありましたら、誰かご指摘ください。

10xPBSと1xPBSのpHの違い 削除/引用 No.817-1 - 2008/03/13 (木) 09:29:36 - PBSはてな ラボの仕事として10xPBSを作ることになりました。 以下のレシピを用いました。 80g of NaCl 2.0g of KCl 14.4g of Na2HPO4 7H20 2.4g of KH2PO4 NaOHでpHを7.4にあわせて1Lにメスアップ。 ところが1xPBSのpHをはかってみると8.0に近いのです。 どこか問題があるでしょうか、 また、この現象の理論的背景を教えていただけますでしょうか。 1xも10xも同じpHになると考えていました。

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