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マウス大腸からの上皮細胞分離
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No.813-TOPIC - 2008/03/12 (水) 16:32:51 -
はると
いつも参考にさせていただいております。
現在、マウスのDSS腸炎やTNBS腸炎を作成し、全大腸組織からRNA抽出、real-time PCRを行っています。
大腸上皮細胞だけを分離し、RNAを抽出する方法を教えていただければ幸いです。
EDTA等を使用する方法があるようですが、最も簡便に行え、かつRNAの質が保たれる方法はどれなのでしょうか?
初心者の質問でどうもすいません。
宜しくお願いします。
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No.813-4 - 2008/03/15 (土) 14:42:42 - よっしー
シェイクは37℃でシェーカーで振っていました.
培地はHEPESとFCSを加えていたと思います.
参考文献はPNAS 1995. 92 : 6147-6151
なんかどうでしょうか.
(無題)
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No.813-3 - 2008/03/14 (金) 23:04:03 - はると
よっしーさん、レスありがとうございました。
大腸を反転させ,培地中でシェイクさせます.
→この場合、培地のみで他は何も加えなくてOKなのでしょうか?
シェイクというのは感覚的にはわかるのですが、具体的にはどうされていますか?
IEL調整法は何か参考になるHP、文献等はありますか?
いろいろ聞いてどうもすみません。
(無題)
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No.813-2 - 2008/03/12 (水) 19:14:32 - よっしー
大腸を反転させ,培地中でシェイクさせます.
上清をグラスウールに通し細胞を回収します.
そうするとIELとECが採れます.
その後,密度勾配法(パーコールなど)でIELとECを
分離すると,出来上がりです.
IEL調整法を参考にされるとよろしいのではないでしょうか.
マウス大腸からの上皮細胞分離
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No.813-1 - 2008/03/12 (水) 16:32:51 -
はると
いつも参考にさせていただいております。
現在、マウスのDSS腸炎やTNBS腸炎を作成し、全大腸組織からRNA抽出、real-time PCRを行っています。
大腸上皮細胞だけを分離し、RNAを抽出する方法を教えていただければ幸いです。
EDTA等を使用する方法があるようですが、最も簡便に行え、かつRNAの質が保たれる方法はどれなのでしょうか?
初心者の質問でどうもすいません。
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