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(無題) 削除/引用 No.788-2 - 2008/03/06 (木) 13:10:36 - Ｔ 普通の CMV プロモーター等に繋いだものは発現しますか？ 個別の遺伝子で蛋白が合成されにくい、あるいは分解されやすいなどで検出できないことは珍しくありません。 mRNA 量の変化を見てみれば、Tet-off 系の問題かインサートの問題かは区別がつくでしょう。

pTRE-Tightの発現について 削除/引用 No.788-1 - 2008/03/06 (木) 12:58:57 - スターリングラード 現在、ある遺伝子のtet-inducibleの系を作ろうとしています。Clontechから購入したTet-Off cell line(Doxをoffにすると目的遺伝子が発現する）に、目的遺伝子のORF(Kozakシークエンス付き）をクローニングしたpTRE-Tightをtransfectionさせる段階です。 まず最初に目的遺伝子の入ったpTRE-Tightの一過性発現を見るために、Tet-off cell lineにLipofectamineLTXでtransfectionしてタンパクレベルで発現しているか否か、を確認しましたが、発現が認められません。COS細胞にいれても発現が認められません。目的遺伝子ORFのsequenceにもmisreadingはなく、またtet-off cell lineも（Luc vector導入にて）Dox offにてLuc activityが上昇することを確認しています。 どこに問題があるのでしょうか？細胞と目的遺伝子との相性がわるいのでしょうか。もしくは他の発現ベクターを使ってみるほうがよいのでしょうか。 ご教示よろしくお願いいたします。

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