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RNA in formamide の濃縮 トピック削除
No.785-TOPIC - 2008/03/05 (水) 15:34:07 - カナマイシン
いくつもスレ立てしてすみません。

以前このフォーラムで、RNAをホルムアミドに溶解して保存すると安定だ、
ということを教わりました
(参考論文:Chomczynski, Nucl. Acids Res. 20(14): 3791 (1992))。
確かにほとんどの用途で使え、非常に重宝しております。

ところが!! 困ったことが起こりました。
ある実験に際し、遠心エバポレーターでRNA溶液を濃縮→粉末化する必要があるのですが、
ホルムアミドの飛びにくいこと飛びにくいこと・・・。
体感的には水の5~10 倍の時間がかかっています。
wikipediaによればホルムアミドの沸点は210˚C。これは厳しい。
確かに時間をかければ飛ぶのですが、時間の制約上、早く濃縮したいのです。

質問ですが、
・何か早く飛ばすいい方法はないでしょうか。
・ひとつ考えたのが、エタ沈で濃縮してしまう方法です。
 上記参考論文には、
 "RNA can be readily precipitated from formamide
 by the addition of four volumes of ethanol (results not shown)."
 とあるのですが、どなたかやられたことのある方いらっしゃいますか?
 収率は? 再現性は? 塩無くて本当に大丈夫なの? といろいろ心配です。

ご教授のほど、よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.785-3 - 2008/03/06 (木) 23:40:52 - カナマイシン
とりあえず、文献通り試してみました。
塩は入れず、RNase Free 100% EtOH を 4 vol. 入れ、
Top speed, 4度で10 分遠心したところ
RNAとおぼしき沈殿がばっちり見られました。

再現性等々まだわかりませんがとりあえずはご報告まで。

(無題) 削除/引用
No.785-2 - 2008/03/05 (水) 15:35:10 - カナマイシン
文字化けしました。

ホルムアミドの沸点は摂氏210度

です。

RNA in formamide の濃縮 削除/引用
No.785-1 - 2008/03/05 (水) 15:34:07 - カナマイシン
いくつもスレ立てしてすみません。

以前このフォーラムで、RNAをホルムアミドに溶解して保存すると安定だ、
ということを教わりました
(参考論文:Chomczynski, Nucl. Acids Res. 20(14): 3791 (1992))。
確かにほとんどの用途で使え、非常に重宝しております。

ところが!! 困ったことが起こりました。
ある実験に際し、遠心エバポレーターでRNA溶液を濃縮→粉末化する必要があるのですが、
ホルムアミドの飛びにくいこと飛びにくいこと・・・。
体感的には水の5~10 倍の時間がかかっています。
wikipediaによればホルムアミドの沸点は210˚C。これは厳しい。
確かに時間をかければ飛ぶのですが、時間の制約上、早く濃縮したいのです。

質問ですが、
・何か早く飛ばすいい方法はないでしょうか。
・ひとつ考えたのが、エタ沈で濃縮してしまう方法です。
 上記参考論文には、
 "RNA can be readily precipitated from formamide
 by the addition of four volumes of ethanol (results not shown)."
 とあるのですが、どなたかやられたことのある方いらっしゃいますか?
 収率は? 再現性は? 塩無くて本当に大丈夫なの? といろいろ心配です。

ご教授のほど、よろしくお願いします。

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