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ゼラチン 削除/引用 No.782-10 - 2008/03/13 (木) 08:02:54 - x 前いた研究室でミルクタンパクの解析をやっていたグループの人がゼラチンを使っていました。 今ちょっと調べたらフィッシュゼラチン（2%)でやってるみたいですね。 かなり安価だと思います

BSA 削除/引用 No.782-9 - 2008/03/11 (火) 12:09:58 - protein+kinase リン酸化タンパクのウエスタンの場合はスキムミルクを使うとバックグラウンドが高くなるので 通常、スキムミルクではなくBSAを使います。BSAは高級なもののほうがいいですが、 大量にウエスタンする場合は予算が持たないのでシグマ等の試薬カタログをみられて妥当な お値段のものを選択される事をおすすめしますが、あまり精度のよくないBSAはウエスタンの仕上がりも良くないときいた事があります。

PVA 削除/引用 No.782-8 - 2008/03/11 (火) 02:21:43 - Atom PVA (Polyvinil alcohol)を通常のウエスタンに使ったことがあります。BSAと同程度にはブロッキングしてくれる様です。1ug/mlPVA in PBS /RT /5minで充分です。他にPEGを使う人もいるようですが、私は試したことがありません。

BSA 削除/引用 No.782-7 - 2008/03/10 (月) 11:05:09 - cbb シグマのBSAのお高いヤツを使ってました。A6003か、A3803。 お高いですが、ブロッキングなんてミニゲル一枚分なら ５mLもあればできるので、液量をケチる方向で。 PVPは使ったことないですね。 スキムミルクは駄目でした。

(無題) 削除/引用 No.782-6 - 2008/03/06 (木) 13:29:10 - K 実験系にポジコンネガコン(もちろん、可能ならば、ということですが)を入れて、スキムミルクでブロックしたもの、その他のブロッキング剤を用いたものを進めてみてはいかがでしょうか？

egg albmin 削除/引用 No.782-5 - 2008/03/05 (水) 20:31:17 - TS BSAは高いので、egg albminを使っています。濃度は、BSAノ場合と同じです。

(無題) 削除/引用 No.782-4 - 2008/03/05 (水) 15:29:40 - R わたしもGEヘルスケアの使ってますが、見た目スキムミルクです。 なのでリン酸化タンパクには使っていませんが、リン酸化タンパクの検出も大丈夫なのでしょうか？ カゼインなどが除去されているのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.782-3 - 2008/03/05 (水) 13:43:03 - 小児科医師（ゆとり教育） 私はGE Healthcareの「Mambrane blockng agent (RPN2125V)」という製品を使っています。値段は数千円だったと思います。

(無題) 削除/引用 No.782-2 - 2008/03/05 (水) 13:21:12 - おお BSAとかよく使われるみたいです。あとはPVP(polyvinylpyrroxidone)のようなタンパクでないやつとか。 http://www.abcam.co.jp/index.html?pageconfig=reviews&intAbID=9319

ウエスタンのブロッキング 削除/引用 No.782-1 - 2008/03/05 (水) 13:00:46 - うえすたんたん 初歩的な質問ですみません。主にリン酸化タンパクの発現を調べているのですが、これまでスキムミルク５％濃度で1−2hrブロッキングしています。リン酸化タンパク発現の場合はスキムミルクはあまりよくない、とは聞いているのですが、何を使ったらよいかわかりません。以前ブロックエースを使いましたが、高価であまり購入できません。具体的にどの会社の何をどの程度の濃度で使用しているか教えていただけませんでしょうか。

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