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培養細胞からRNAを抽出 トピック削除
No.757-TOPIC - 2008/02/29 (金) 10:12:20 - りんりん
培養細胞からトリゾール試薬を用いて、
RNAの抽出をしています。

dishにトリゾール液をまいて、
細胞をかき取り、
20回ピペッティングしてDNAを切ってから、
−80℃で凍結しています。

このピペッティングの作業は、
解凍後、RNAを抽出し始める時に
行ってもかまわないものでしょうか？

ご存じの方がいらしたら、教えてください。
　
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.757-4 - 2008/03/03 (月) 08:06:56 - りんりん
回答ありがとうございました。

扱う数が多いので大変ですが、
がんばります。

(無題) 削除/引用
No.757-3 - 2008/03/01 (土) 13:38:06 - おお
凍結保存前にやってください。トリゾールではないですが、同じ系統の試薬をディッシュにかけて、ディッシュごと保存したことがありますが、意外とRNAが分解されているようで、収量が少なかったりしたことがあります。収量だけならまだしも、分解はかなり問題があります。

(無題) 削除/引用
No.757-2 - 2008/02/29 (金) 10:38:10 - RT
あまり詳しくないのですが、

おそらくピペッテングはDNA切断というよりも細胞融解（ホモジナイズ）の目的の方が強いと思います。
それから考えますと、凍結保存する前にやるのが良いと思います。

培養細胞からRNAを抽出 削除/引用
No.757-1 - 2008/02/29 (金) 10:12:20 - りんりん
培養細胞からトリゾール試薬を用いて、
RNAの抽出をしています。

dishにトリゾール液をまいて、
細胞をかき取り、
20回ピペッティングしてDNAを切ってから、
−80℃で凍結しています。

このピペッティングの作業は、
解凍後、RNAを抽出し始める時に
行ってもかまわないものでしょうか？

ご存じの方がいらしたら、教えてください。
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