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(無題) 削除/引用 No.741-7 - 2008/02/28 (木) 00:18:52 - コントロール >反応時間は３０〜６０分で振って濃度も振ったんですけど、うまくいきませんでした。 つまり、荒く振るというのは１分とかも含める、濃度も１００（１０）分の一とかということになります。もちろん、架橋材マイナスコントロールではモノマーの位置にあるべきです。

(無題) 削除/引用 No.741-6 - 2008/02/27 (水) 18:07:50 - とも Tさんコメントありがとうございます。 invitrogenのBlue Native PAGEもやりました。 いろいろ条件変えたんですがうまくいきませんでした。

(無題) 削除/引用 No.741-5 - 2008/02/27 (水) 12:40:24 - Ｔ Blue Native PAGE は？

(無題) 削除/引用 No.741-4 - 2008/02/27 (水) 11:27:27 - とも 標準さん、Aさんコメントありがとうございます。 反応時間は３０〜６０分で振って濃度も振ったんですけど、うまくいきませんでした。 ゲルろ過は何度かやってdimer、tetramerがみえたので、gel上でもみたいなと思って実験しています。 あとtagをかえてIPなどでも同じタンパク同士の結合が見えたので、dimer以上はとっていると思うんですけど、gelではうまくいきませんでした。 論文などと同じ方法でやっても無理だったので、他の方法を検索してみます。

(無題) 削除/引用 No.741-3 - 2008/02/26 (火) 18:28:04 - A ゲルろ過は多量体確認に良く使われます。 ただゲルろ過カラムは非特異的に蛋白質が結合する可能性が ありますから塩濃度を0.5-1Mにしたり界面活性剤を入れたりします。 もしそれらの添加が出来て十分量のサンプルがあるのであれば ゲルろ過を試す価値はあると思います。

(無題) 削除/引用 No.741-2 - 2008/02/26 (火) 12:46:23 - 標準 cross-linkの場合は、反応時間、架橋剤濃度を荒めに振ってみるとよいでしょう。dimerのバンドが見えないから失敗と言うことにはならないと思います。

タンパクのmultimerization 削除/引用 No.741-1 - 2008/02/26 (火) 09:51:51 - とも 現在タンパクの多量体形成をみたいのですが、なかなかうまくいきません。 native PAGEを使ったり、cross-linkさせたりしましたが、ウエスタンでみるとラダーになってしまい、dimerやtetramerのバンドが全くみえません。 このような実験やったことある人いましたら、何か良い方法教えてください。 ちなみにcross-linkerでDTSSP使ったことある人いましたら、どのように反応させたか教えてください。

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