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IPの回収効率について トピック削除
No.735-TOPIC - 2008/02/25 (月) 17:57:10 - IP
こんにちは。
研究初心者の学生です。

目的のタンパク質にFLAGをタグとしてつけて、IPしているのですが、どうも回収効率が良くありません。
抗体はFLAGのmonoclonal抗体を用い、プロテインGアガロースと結合させて回収を図っているのですが、やはりIPする際にはmonoclonalではなくpolyclonalの方が回収の効率としては良いのでしょうか?

ご教授よろしくお願いします。
 
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No.735-8 - 2008/02/28 (木) 20:49:50 - IP
>aさん

ありがとうございます。私が用いているのも3×FLAGなので試してみる価値があります。
早速検討してみます。

(無題) 削除/引用
No.735-6 - 2008/02/28 (木) 13:28:08 - a
僕もM2gel愛用してます。
3xFLAGタグで200倍検出効率が上がるという話もあります。

(無題) 削除/引用
No.735-5 - 2008/02/28 (木) 11:46:39 - IP
>Bさん
ありがとうございます。早速検討してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.735-4 - 2008/02/27 (水) 00:05:37 - B
FLAGならSigmaのANTI-FLAG M2 affinity gelがお勧めです.
FLAG-tagタンパクのIPや精製によく使われているので,
ほとんどのケースで動くはずです.

(無題) 削除/引用
No.735-3 - 2008/02/26 (火) 18:47:04 - IP
>A様

ありがとうございます。
私はモノクロもポリクロも市販のものに頼っておりますが、抗体の質の問題になると、やはり自分でFLAGペプチドを合成してウサギに免疫して、ポリクロ抗体を作製した方がよいのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.735-2 - 2008/02/26 (火) 18:29:37 - A
この辺りはモノクロ、ポリクロに限らず抗体の質にかなり左右されるはずです。

IPの回収効率について 削除/引用
No.735-1 - 2008/02/25 (月) 17:57:10 - IP
こんにちは。
研究初心者の学生です。

目的のタンパク質にFLAGをタグとしてつけて、IPしているのですが、どうも回収効率が良くありません。
抗体はFLAGのmonoclonal抗体を用い、プロテインGアガロースと結合させて回収を図っているのですが、やはりIPする際にはmonoclonalではなくpolyclonalの方が回収の効率としては良いのでしょうか?

ご教授よろしくお願いします。

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