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(無題) 削除/引用 No.727-3 - 2008/02/23 (土) 11:29:08 - さぶ ○細胞を直接SDS-サンプルバッファーで破砕しているか？（抽出処理をしているか否か） ○そのタンパクが膜局在等をしていないか？ この辺を考慮すると、、、、、可能性はあります。考えてみましょう。

(無題) 削除/引用 No.727-2 - 2008/02/23 (土) 10:56:31 - ぽすどっく こういう事案に遭遇したことはないのですが，いくつか理由を考えてみました． まず，細胞の自家蛍光や抗体の非特異的結合は同程度でしょうか．染色のネガコンでは差は見られませんか？ 白血病細胞株ではタンパクの局在が変わったりすることありますでしょうか？．BDのキットは細胞質タンパクを細胞外に漏らす傾向があるので，局在によって細胞内に残る量が変わったりすることあるのかもしれません．（当方の環境では，BDのキットでは，1logくらい細胞質タンパクの蛍光強度が落ちます） 該当タンパクはすべての細胞で発現しているのでしょうか？．一部の細胞のみ発現しているような場合ですと，陽性率とタンパク量に乖離が出てもおかしくないような気もします． このような点は問題外でしょうか．

細胞内フローサイトとウェスタンブロットの結果の食い違い 削除/引用 No.727-1 - 2008/02/23 (土) 10:08:41 - 風呂ー ある細胞内蛋白の検出をしたくて抗体を購入しました。業者のウェブサイトでは用途はWesternとImmunocytochemistryとなっていますが、過去の論文で細胞内フローサイトメトリーにも使われていたので、白血病細胞株と末梢血を使って、Westernとフローの両方やってみました。その結果、Westernの結果は過去の報告どおり白血病細胞株では高発現、末梢血では低発現だったのですが、フローについては逆の結果になってしまいました。結果には再現性があり、また別の抗体も試してみたのですが、同様の結果でした。細胞内フローに関してはBDのキットを使って行っています。 この細胞内フローとWesternの結果の違いをどう考えたらよいのか困っています。実験がうまくいっていたら、やはりこの２つの実験方法の結果は一致すべきでしょうか。どなたか同様の経験のある方がいらっしゃいましたらアドバイスをお願いします。

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