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アグロバクテリウムによる遺伝子導入 トピック削除
No.693-TOPIC - 2008/02/15 (金) 19:21:54 -
アグロバクテリウムを用いてマーカー遺伝子を植物ゲノムへ導入しました。ランダムな位置への導入を期待していましたが、サザンハイブリダイゼーションで確認したところ、半分以上が同じゲノムの位置に導入されていました。また、導入された遺伝子の近傍部位を確認したところ、本来導入されるべきでないボーダーシークエンスの外側にあるプラスミド配列も一緒に導入されていました。このようなことがおこるのは、どのようなことが原因なのでしょうか?
また、この件に関して何かアドバイスをいただけませんでしょうか?
 
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みたところ 削除/引用
No.693-3 - 2008/02/16 (土) 16:13:01 - ダメ先輩
>また、この件に関して何かアドバイスをいただけませんでしょうか?

普段勉強していないなら、レポートのときぐらいは丸投げせずに
自分で教科書等を読んで考えないと、授業料が無駄になりますよ。

(無題) 削除/引用
No.693-2 - 2008/02/15 (金) 22:33:08 - e

T-DNAの外側の配列が挿入されることはあります。
これを防ぐ手段は特にはないはず(私の知る限りですが)。
それが問題になるほど頻度は高くないはずです。
原因については明らかにはされていないと思います。


挿入位置が同じというのはシークエンスで確認したのでしょうか?
私は植物ではなく糸状菌を扱っているので
ひょっとしたら植物では報告があるのかもしれませんが、
半分以上がほぼ同じ場所に挿入されるなどということは
聞いたことがありませんし、自分の経験からも考えにくいです。
サザンで数サンプル検討して、サイズがほぼ同じというだけなら
ゲノムの同じ場所とはいえないのではないでしょうか?

もしシークエンスで確認されているのなら
それはある意味すごく興味深い現象に思われます。

アグロバクテリウムによる遺伝子導入 削除/引用
No.693-1 - 2008/02/15 (金) 19:21:54 -
アグロバクテリウムを用いてマーカー遺伝子を植物ゲノムへ導入しました。ランダムな位置への導入を期待していましたが、サザンハイブリダイゼーションで確認したところ、半分以上が同じゲノムの位置に導入されていました。また、導入された遺伝子の近傍部位を確認したところ、本来導入されるべきでないボーダーシークエンスの外側にあるプラスミド配列も一緒に導入されていました。このようなことがおこるのは、どのようなことが原因なのでしょうか?
また、この件に関して何かアドバイスをいただけませんでしょうか?

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