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(無題) 削除/引用 No.69-21 - 2007/08/28 (火) 18:00:04 - sheashea 皆様の貴重なご意見を参考に、書き込みしてからいろいろやってみました． ゲル液ストックとTEMEDとAPSのみを混ぜたところ、早々と固まりました。 その後、この固まった組成の中に、SDSが混ざると固まらないことが最初に判明、作り直したところ、解決したかのように見えました． APSを溶かすときに音がすることは知りませんでした． 今まで聞いたことがなく、上手く行ってたときも同様でした． 今回は気をつけて見ましたところ、してるのか？してないのか？という感じですが、どんなもんでしょうか？ ちなみに私は片方の耳しか聞こえません. 盆があけた直後から昨日に至るまで、施設全体が停電という事態にみまわれ、事件室も灼熱地獄化していたと思われます． 新品APSが届き次第、再開して解決していきます． 皆様、いろいろありがとうございました． 解決しなかったら、またご教授をよろしくお願いいたします．

(無題) 削除/引用 No.69-20 - 2007/08/22 (水) 11:54:50 - カナマイシン >R様、通りすがり様 ご教授ありがとうございました。不勉強でした。 当方の研究室はけっこういい加減で、 共用の抗生物質に関して現状では湿気など気にしていない状況です。 APSも室温デシケータ内保存です。 私の権限ではシステムを変えられそうにないですが、 今後のために参考にさせていただきます。

(無題) 削除/引用 No.69-19 - 2007/08/19 (日) 10:29:28 - 通りすがり R様に同意見です． また，湿気やすいことが分かっている試薬なら，キャップの閉栓部分をパラフィルムでグルグル巻にして密閉を補強するべきです

(無題) 削除/引用 No.69-17 - 2007/08/17 (金) 14:41:04 - R 抗生物質やその他の粉試薬を冷蔵or冷凍保存から使用する場合、 試薬を必ずしっかり室温に戻してからから蓋を開けるようにします。 これで試薬への湿気は防げると思います。 参考までに

(無題) 削除/引用 No.69-16 - 2007/08/17 (金) 14:11:44 - カナマイシン >Rさん APS粉末を低温で保存すると、出したりしまったりの際に 湿気をずいぶん吸ってしまうのではないか？と思い、 当方は室温のデシケーター内に置いてあります。 確固たる自信があるわけではないのですが・・・ 作り置きが意外と大丈夫なのは経験済みです。 作っても大した手間ではないので最近は用事調製してしまってますが、 粉が吸湿してしまうのであればかえって作り置きの方が安全なのかも？？

こんなことも… 削除/引用 No.69-15 - 2007/08/17 (金) 09:52:15 - ビス子 失礼とは思いますが、初歩的なイタいミスを紹介します。 私たちのところでは、アクリルアミドストック溶液を作るときにBisを入れるのを忘れていました。 30%のストックを作るのに、その全てをアクリルアミドで作ってしまい、それにしばらく気付かずに「かたまらないねー」と2、3日頭をひねっていたことがります。 お恥ずかしい経験ですが、慣れているつもりでもこんなうっかりミスってやってしまい、それになかなか気付かないものです。 一つの可能性として書き込みさせて頂きましたm(__)m

(無題) 削除/引用 No.69-14 - 2007/08/16 (木) 20:25:09 - R 昔の記憶であいまいですが、APSの粉は-20℃か4℃保存していました。 APSは一度調整して-20℃保存で、凍結融解して使用しても問題はありませんでした。 参考までに。

(無題) 削除/引用 No.69-13 - 2007/08/16 (木) 19:53:10 - カナマイシン あつくてしにそうさんと同意見です。 APS、粉の状態でも湿気ると「死んで」しまいます。経験あります。 デシケーターに入れてても誰かがうっかり放置したりするとダメになります。 粉末APSにDWを加えて溶かす際、パチパチと音が聞こえれば元気な APSである、と聞いたことがあります。 信憑性はわかりませんが、少なくとも私は毎回音を確認してます。 一方、TEMEDに関しては、10年くらいちびちびと使っていたにもかかわらず ついぞ問題は生じませんでした。ビンは４度保存です。 というわけで、APS買い直しに一票。

(無題) 削除/引用 No.69-12 - 2007/08/16 (木) 17:44:19 - Ｔ そういえば以前もこんなトピがありましたね。 この時はアクリルアミドを買い直すことで解決したようです。 http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;Code=3091

(無題) 削除/引用 No.69-11 - 2007/08/16 (木) 16:22:12 - ああ 固めるのに重要なのはAPSとTEMEDで，それ以外の成分は特にゲル化には関係ないはず。 作成手技に問題がないのであれば，APSとTEMEDを新たに購入しなおすしかないのでは。

(無題) 削除/引用 No.69-10 - 2007/08/16 (木) 16:15:51 - あつくてしにそう 私が聞いた話によると， APSは粉の状態で保存していても 湿気るとゲルが固まらなくなることがあるそうです。 mom様がおっしゃるように，新品のAPSを使ってみてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.69-9 - 2007/08/16 (木) 16:10:38 - sheashea 書き入れ忘れです． 以前から、APSは作成後10日で作り直してました． アクリルアミドのストックも作成後2ヶ月以内を消費期限としました． 固まらなくなってから繰り返し同じ物を使っているのは、もちろん、作り直してから4日目のものですが、1.5Mと0.5MのTris bufferのみです． 他はすべて、要時調整してます． ここ数ヶ月、実験室が停電をして、灼熱地獄化したことが何度もあります． 年数回、同じことが数年にわたってあります． 西日がさんさんと入る部屋です、夏の気候(そんなことでは困るけど)によってかもしれませんね． ありがとうございます、少し先が見えたかもしれません．

(無題) 削除/引用 No.69-8 - 2007/08/16 (木) 16:08:00 - Ｔ とりあえず、アクリルアミド原液、TEMED, APS だけをエッペンか何かで混ぜてみましょう。量は適当で結構です。これで固まるようなら原因は水、Tris、SDS、容器などという事になります。

APSの保存 削除/引用 No.69-7 - 2007/08/16 (木) 16:05:43 - mom 昔、普通に室温で試薬棚に入れていたら、夏場に急に駄目になったことがあります。 その時は、新しいAPSを買ったら上手く行きました。新品を買ってみてはいかがですか？

SDS-PAGEが固まらない...... 削除/引用 No.69-5 - 2007/08/16 (木) 15:53:05 - sheashea 最近はAPSも要時調整しています． 今日の昼前にも再び作成したのですが、APS、TEMEDをともに2倍量いれてもいまだに固まってくれません．今日は30℃に入れてます． すべての試薬を作り直してまだだめということは、水？というほどの原因不明です． 脱気も30分はしているんです． まーったく変わらないいつもとおんなじ方法でなのにどうしたのでしょうか．

(無題) 削除/引用 No.69-4 - 2007/08/16 (木) 15:39:20 - bloot TEMEDだけでなくAPSも新品にすべきかと。 作り置きで古かったりすると、固まらなかったりします。 用事調製で試してみたら如何ですか？

SDS-PAGEが固まらない...... 削除/引用 No.69-3 - 2007/08/16 (木) 13:20:55 - sheashea お返事をありがとうございます． はい、TEMED以外はすべて粉からです． APSもTEMEDも、倍量してみたりもしましたが、だめでした． TEMEDが古いのか？と思って、新品ものを使用したのですが、それもだめです．

(無題) 削除/引用 No.69-2 - 2007/08/16 (木) 12:59:16 - ~ APSも新しく粉から作りましたか？ 固まりが悪いときに、 APSとTEMEDを両方とも2倍量にしていたこともあります。

SDS-PAGEが固まらない...... 削除/引用 No.69-1 - 2007/08/16 (木) 12:14:53 - sheashea こんにちわ。 SDS-PAGEのゲルが突然まったく固まらなくなりました。 全部作り変えて、TEMEDも新品にして、なのに、まったくです。 温度も25‐37度まで、いろいろしてみましたが、結果は同じ。 何が原因なのか、まったくわからない状態で、非常に困ってます。 お知恵と救済をいただきたく、よろしくお願いいたします．

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