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酵母の凝集
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No.672-TOPIC - 2008/02/13 (水) 15:26:21 -
ii-Yeast
出芽酵母を使って実験をしているのですが、酵母が凝集して、細胞数が上手くはかれません。YPDでもSD培地でも同様です。細胞数は、Nanodrop を使って濁度を測ったのですが、どうも実際の数と不一致にみえるので、計算版を使っています。将来的にはセルソーターを使って、核内DNAコンテントもみたいのですが、今は数を数えるのに苦労しています。基本的なことで申し訳ありませんが、どなたか教えて頂けませんか?
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有り難うございました。
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No.672-5 - 2008/02/13 (水) 21:40:23 -
ii-Yeast
FUJさん
有り難うございました。
自分では特に変異をいれてはおらず、SK1 系の細胞株として分与をして頂いたものなのですが、細胞質分裂の欠損かもとは、全く思いもしませんでした。それを判断するためには、検鏡で核の数をみて判断すればよいのかと思っていますが、、あまりそういったところに知識がないので考えてみます。
また解らないことがでてくるかと思いますが、宜しくお願いします。
(無題)
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No.672-4 - 2008/02/13 (水) 21:04:27 - FUJ
お使いの細胞が、何かの変異株であるのでしたら、
サイトキネシス defectの表現型が出ている可能性があります。ご検討してみてください。
有り難うございました。
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No.672-3 - 2008/02/13 (水) 20:43:08 -
ii-Yeast
弘法さん
早速のご回答を有り難うございました。
一応、増殖良好な時にみているのですが、何かストレスがあるのかも知れませんね。できれば、今使っている株を使いたいので、教えて頂いた10mMのEDTA での洗浄やマンノースの添加を行ってみます。
Nanodrop の件、納得しました。セルで測定する機器をよその教室で探してみます。
有り難うございました。
(無題)
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No.672-2 - 2008/02/13 (水) 18:38:34 - 弘法
凝集はレクチンによるものらしいので、10mM程度のEDTAを加えることで改善するかもしれません。マンノースを加えるのも効くかも。
生育が悪くなると凝集がひどくなる例があるので、今の培養条件が何かストレスを与えているのかも知れません。
また、お使いの株が特別なものでないなら、凝集しにくい株を使う手もあります。
なお、Nanodropは濁度を測るには光路長が短すぎる気がします。
酵母の凝集
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No.672-1 - 2008/02/13 (水) 15:26:21 -
ii-Yeast
出芽酵母を使って実験をしているのですが、酵母が凝集して、細胞数が上手くはかれません。YPDでもSD培地でも同様です。細胞数は、Nanodrop を使って濁度を測ったのですが、どうも実際の数と不一致にみえるので、計算版を使っています。将来的にはセルソーターを使って、核内DNAコンテントもみたいのですが、今は数を数えるのに苦労しています。基本的なことで申し訳ありませんが、どなたか教えて頂けませんか?
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