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(無題) 削除/引用 No.636-7 - 2008/02/07 (木) 11:15:43 - へんじん その非特異の場所にもよると思います。あと遺伝子の長さも。 クローニング後シーケンスするのが一番確実かと思います。 方向確認or挿入確認をするにしても問題の場所の両側で 確認できる制限消化処理確認を忘れないのが基本です。

(無題) 削除/引用 No.636-6 - 2008/02/07 (木) 10:31:44 - C 確かに切り出し精製をするので大丈夫そうですね。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.636-5 - 2008/02/07 (木) 10:30:34 - C ありがとうございました

(無題) 削除/引用 No.636-4 - 2008/02/07 (木) 10:22:12 - カナマイシン お気持ち、よくわかります。 しかし、制限酵素はCC様のおっしゃるとおり緻密な基質特異性を持っています。 結論を言えば「原則として切れない」です。 ６塩基認識の酵素が５塩基マッチで切れてしまっては大変です。 但し、~様のおっしゃるとおり、非特異的切断が生じる可能性はゼロではありません （私はKpnIにそこまで詳しくないですが。カタログ等に酵素のクセが書いてあるかも？）。 特にKpnIは、反応溶液中の塩濃度に強く影響されるようです。 とてもとてもとても運が悪ければ、スター活性での非特異的切断により その位置で切れてしまう可能性があるかもしれません。 しかし滅多なことをしない限りスター活性は生じないし、また生じたとしてもごくわずか。 ~様のおっしゃるとおり、アガロースゲル電気泳動後に目的バンドを切り出せば まずだいじょうぶですよ。

(無題) 削除/引用 No.636-3 - 2008/02/07 (木) 09:05:44 - ~ 非特異な切断が起きるかどうかは、切ってみなければ分かりません。 ただ、cDNAをKpnIで切断後に電気泳動して切り出すでしょうから、 異なる長さのフラグメントになれば、切り出しの際に分けられるかと思います。

(無題) 削除/引用 No.636-2 - 2008/02/07 (木) 00:02:57 - CC 生命現象はあなたが考えているより精密にできているようです・・・・・

制限酵素処理 削除/引用 No.636-1 - 2008/02/06 (水) 23:16:15 - C 融合タンパク質を作製するために、制限酵素を選んでいるのですがひとつお聞きしたいことがあります。 Kpn Iを使用しようと思っています。そこで目的のcDNA配列にこのKpn I配列があるか確かめたところありませんでした。ちなみにKpn Iは下のように切断します。 認識部位　　　　切断様式 5'GGTACC　　 5'---GGTAC C---3' 3'CCATGG　　 3'---C CATGG---5' ここで気になる点があります。目的のcDNAにGGTACAという配列がありまた。 最後のCがAなだけでしかも切断部位を見ると最後のCのとこおで切れています。なのでもしかしたらcDNAも切断されてしまうのではないかと心配です。 少し分かりにくい文章になってしまい申し訳ないのですが意見を聞かせてほしいです。よろしくお願いします。

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