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Lysis bufferの選択 トピック削除
No.621-TOPIC - 2008/02/03 (日) 18:25:53 - ウェスタン初心者
いつも参考にさせていただいてます。

自分はc-kitの発現をWestern blottingで見ているのですが、Lysis bufferの選択に迷っています。論文を探してみても、いいのがうまく見つからなかったので、どなたかおしえていただけないでしょうか?
 
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最適ではないかもしれませんが 削除/引用
No.621-4 - 2008/02/06 (水) 22:58:59 - そば
横槍になって申し訳無いですが、一つの選択肢として。

抗体を購入した企業が公開しているプロトコールで使用しているLysis bufferを選択する、というのが無難で失敗の少ない選択肢になると思います。

(無題) 削除/引用
No.621-3 - 2008/02/06 (水) 19:34:34 - ウェスタン初心者
c-kitは膜タンパクなのですが、ソニケーション後に12000rpmで遠心しています。ソニケーションも遠心も必要ないのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.621-2 - 2008/02/04 (月) 11:55:47 - とも
細胞質タンパクなら、PBSにトライトンかNP40を0.5%くらいになるように加えて溶かせば問題ないですよ。

核タンパク質ならそのバッファーで溶かしたあとにソニケーションすれば結構多く取れますよ。
ソニケーションなしでもいいかもしれませんが。。

Lysis bufferの選択 削除/引用
No.621-1 - 2008/02/03 (日) 18:25:53 - ウェスタン初心者
いつも参考にさせていただいてます。

自分はc-kitの発現をWestern blottingで見ているのですが、Lysis bufferの選択に迷っています。論文を探してみても、いいのがうまく見つからなかったので、どなたかおしえていただけないでしょうか?

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