細かい原理は調べてみてください。
1.実用上はフィルムが真っ黒になるのを防げます。(蛍光ラベルの場合は取り込み画像が真っ白になるのを)
完全に洗い流す必要は無いです。15-30分程度tween等の入った緩衝液で洗って使っています。プロトコール集を参考にしてください。
長時間洗浄するとバックが黒くなって解析しにくくなります。
スキムミルクなのは安価でどこででも手に入るからです。
古くはBSAでも行っていたようです。
2.温度は特別な機材が必要ない温度(25度程度の室温か冷蔵庫の4度)で検討するのが良いかと思われます。室温30分から2時間、4度12時間程度を目安にやるのが日程的に楽かと思われます。
ただ、室温1時間だと当たって、4度12時間では当たらない抗体を使ったことがあります。いろいろ試してみてください。
この件に限らず専門外または初学者の内は羊土社などのプロトコール集を読んでください。
頑張ってください。 |
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