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切断プラスミドの精製
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No.581-TOPIC - 2007/11/29 (木) 22:51:18 - GE
今回、安定発現株を作ろうと思っているます。その際、プラスミドを切断して直鎖状にした後トランスフェクションしようと思っています。
そこで質問なのですが、皆さんはプラスミドの制限酵素処理後、どうやってプラスミドを精製していますでしょうか?フェノクロは駄目とかあるのでしょうか?
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No.581-7 - 2007/12/02 (日) 09:20:43 - ~
>どれくらいのクローンを拾っていますか?
目的によりますが、10~100個くらいです。
(無題)
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No.581-6 - 2007/12/02 (日) 01:08:30 - GE
皆様、アドバイスありがとうございます。
フェノクロ抽、エタ沈で問題ないようですね。安心しました。
ところで、皆さんは安定発現株を作成するとき、どれくらいのクローンを拾っていますか?ケースバイケースだと思うのですが、目安として教えていただけないでしょうか?
(無題)
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No.581-5 - 2007/11/30 (金) 20:32:35 - TK-1
ESでgene targetingに使うときを含め、エタ沈またはアイイソプロパノール沈殿+リンスです。フェノクロはしてもしなくてもかわらないのでしません。
(無題)
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No.581-4 - 2007/11/30 (金) 09:38:28 -
a
私もフェノクロ・エタ沈のみですが、70%EtOH Washは2回行っています(完全に脱塩するために)。
(無題)
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No.581-3 - 2007/11/30 (金) 01:50:38 - おお
切断する前のプラスミドのグレードはトランスフェクションに問題ないようであれば大丈夫だと思います。
(無題)
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No.581-2 - 2007/11/29 (木) 23:09:30 - 通りすがり
私は切断後にフェノクロ、エタ沈ですがちゃんと安定発現株が取れてますよ。
切断プラスミドの精製
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No.581-1 - 2007/11/29 (木) 22:51:18 - GE
今回、安定発現株を作ろうと思っているます。その際、プラスミドを切断して直鎖状にした後トランスフェクションしようと思っています。
そこで質問なのですが、皆さんはプラスミドの制限酵素処理後、どうやってプラスミドを精製していますでしょうか?フェノクロは駄目とかあるのでしょうか?
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