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Caco-2細胞でのTER測定 トピック削除
No.525-TOPIC - 2007/11/20 (火) 15:24:17 - へむへむ
Caco-2細胞を用いてTERを測定しています。

Costarの6wellトランスウェル(培養面積4.67cm2)を用いて
培養しています。
細胞を14日間培養したところ、2000Ω・cm2ぐらいの値となりました。

文献を参考にしてみると、12wellのプレート(培養面積1.12cm2)で
250Ω・cm2以上あればよいとあります。
だいだい250を4倍して、1000となるので、
6wellの場合、1000Ω・cm2あればよいとなるのでしょうか?

また、ほかの文献に、6wellプレートで250Ω・cm2以上あればよいと
書かれた文献もあり、どちらが正しいのか悩んでいます。

輸送経路の実験にCaco-2細胞を用いたいと思うのですが、
TER測定が初めてなので、わかりません。
もしよろしければ教えてください。
 
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ありがとうございます 解決済み 削除/引用
No.525-6 - 2007/11/21 (水) 16:38:28 - へむへむ
返信ありがとうございます。

疑問が解決しました。
勘違いしている部分などの指摘もありがとうございました。

良い感じではないでしょうか 削除/引用
No.525-5 - 2007/11/21 (水) 12:18:55 - TS
2000Ω×cm2ですと、TERとしては十分だと思います。私のラボでも、2−3週間後に1500-2000を示します。

>250Ω・cm2以上あれば実験に使用できると文献にあるのですが、
>6-well、12-well関係なく、250Ω×cm2以上あればよい
>ということになるのでしょうか?

実験に使用できるかどうかは、実験系によるとは思いますが、分化させたCaco-2で実験をするということになると、一般的にTERは500 ohm*cm2くらいはあるものだとおもいます。その文献の良否は判断しかねますね。

いずれにしても、へむへむさんのCaco-2は大丈夫だと思いますよ。他の分化マーカーをチェックするという手もありますが、十分分化してると言っても良いと思います。

6-wellでの実測値 削除/引用
No.525-4 - 2007/11/21 (水) 11:03:03 - へむへむ
返信ありがとうございました。

面積が広いほど測定値が低くなるということですので、
面積をかけることによって6-well、12-wellで培養したということを
補正していることになるんですね、

ということは、TERの単位がΩ×cm2とすると、
250Ω・cm2以上あれば実験に使用できると文献にあるのですが、
6-well、12-well関係なく、250Ω×cm2以上あればよい
ということになるのでしょうか?

14日培養すると、6-wellでの実測値は400くらいを示しました。
培養面積が4.67cm2でしたので、
2000Ω×cm2ぐらいの値になりました。

よろしくお願いします。

確認します 削除/引用
No.525-2 - 2007/11/20 (火) 23:22:07 - TS
最初に、勘違いをされている点があるようなので確認しますが、TERは面積が広いほど測定値は低くなりますよ。単位が、ohm*cm2ですから。たとえば、12well transwellで、測定値が1000であれば、6-well transwellでの測定値は、だいたいその1/4の250でしょう。

Caco-2は、ヘテロな細胞集団のせいもあり、ラボによって(たぶん飼い方によって)示すTERはかなりの違いがあります。
現在の私のラボでは、14日目では、12-wellで1400くらいを示しますが、留学していたラボでは、500程度でした。

>細胞を14日間培養したところ、2000Ω・cm2ぐらいの値となりました。
これは、6-wellでの実測値でしょうか?

Caco-2細胞でのTER測定 削除/引用
No.525-1 - 2007/11/20 (火) 15:24:17 - へむへむ
Caco-2細胞を用いてTERを測定しています。

Costarの6wellトランスウェル(培養面積4.67cm2)を用いて
培養しています。
細胞を14日間培養したところ、2000Ω・cm2ぐらいの値となりました。

文献を参考にしてみると、12wellのプレート(培養面積1.12cm2)で
250Ω・cm2以上あればよいとあります。
だいだい250を4倍して、1000となるので、
6wellの場合、1000Ω・cm2あればよいとなるのでしょうか?

また、ほかの文献に、6wellプレートで250Ω・cm2以上あればよいと
書かれた文献もあり、どちらが正しいのか悩んでいます。

輸送経路の実験にCaco-2細胞を用いたいと思うのですが、
TER測定が初めてなので、わかりません。
もしよろしければ教えてください。

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