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(無題) 削除/引用 No.516-5 - 2007/11/21 (水) 10:03:40 - miY ご返信、ありがとうございました。 empty vectorは、購入したものそのものの原液を用いて試したことがありますが、導入試薬は同じチューブのものを使っていましたので、新しいものを使ってみます。

(無題) 削除/引用 No.516-4 - 2007/11/21 (水) 01:50:08 - おお プラスミドのコンタミとか試薬のコンタミとかを疑ってしまいますが、、、、

(無題) 削除/引用 No.516-3 - 2007/11/20 (火) 16:55:59 - miY ご返信、ありがとうございました。 細胞は24welプレートにまき、導入したDNA量はtotal:1ug/well(1:1:0.01)で、トランスフェクション試薬はLipofectamine2000を2uL使用しました。 測定機器はプロメガのルミノメーター(20/20Luminometer)で、dual Luciferase assayのプログラムがすでに入っていてそれを使いました。 コントロール用に使ったものは、pGL4.71ではなく、4.74の誤りでした。すみません。 empty vectorだけでも過剰に入ると発光する可能性がありますか？

(無題) 削除/引用 No.516-2 - 2007/11/20 (火) 15:55:50 - T 書き込みが無いようなので。 導入するDNAの量、導入試薬との比などは 検討されましたか？ 過剰に入りすぎていることはありませんか？ 測定条件（測定時間等）などは適切でしょうか？ ところで、私はpGL4シリーズは使っていないのですが、 コントロール用に使われているpGL4.71は プロモーターレスではありませんか？ 通常だとTK,SV40,CMVなどが入っている pGL4.73〜4.75を使うと思うのですが、何か理由があるのでしょうか。

ルシフェラーゼアッセイ・emptyベクターで高発光してしまいます 削除/引用 No.516-1 - 2007/11/19 (月) 16:41:11 - miY ルシフェラーゼアッセイ初心者です。 目的遺伝子のプロモーターをpGL4.10に組み込み、目的遺伝子の転写因子を組み込んだCMVのベクター、インターナルコントロールにpGL4.71(Renilla)の３種をPC12にco-transfectionする実験を計画しました。 ところが、 目的遺伝子のプロモーターが入っていないpGL4.10(empty vector)でもプロモーターを組み込んだpGL4.10と同じくらい高発光（６ケタ）してしまい、プロモーター長による差がみれません。トランスフェクションしていない細胞（バックグランド）は200程度です。 ・転写因子（CMVのベクター）を導入しなくても高発光、 ・細胞をCHO、COS、HEKにしても同様、 ・pGL3のemptyベクターでも５ケタの発光でした。 なすすべなく、途方にくれています。 改良点など、何なりとご指摘下さい。よろしくお願いします。

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