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invitrogen GatewayのDestinationVector トピック削除
No.490-TOPIC - 2007/11/14 (水) 17:35:19 - うべこ
今、インビトロジェンのGatewayのDestinationVector
を作製しているのですが、うまくカセットが入らず困っています。
ベクターを平滑末端化して入れているのですがうまくいきません。
どうしたら、カセットがうまく入るか教えてください。
　
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(無題) 削除/引用
No.490-3 - 2007/11/15 (木) 09:28:20 - DEST
大腸菌の選択にクロラムフェニコールはきちんと入れていますか？
やはり、手技的な問題が大きいと思います。
いままでかなりの数のdestination vectorを作りましたが、うまくいかなかったことはないです。

(無題) 削除/引用
No.490-2 - 2007/11/14 (水) 17:55:42 - 1mvitrogen
単純に手技の問題でしょう。
ベクターの完全分解、脱リン酸化、ゲルからの切り出しなどを「行わずに」ベクターとカセットを混ぜて、エタ沈かシリカで精製、そのままライゲーションして「専用の」コンピを形質転換してみて下さい。うまくいくはずです。

invitrogen GatewayのDestinationVector 削除/引用
No.490-1 - 2007/11/14 (水) 17:35:19 - うべこ
今、インビトロジェンのGatewayのDestinationVector
を作製しているのですが、うまくカセットが入らず困っています。
ベクターを平滑末端化して入れているのですがうまくいきません。
どうしたら、カセットがうまく入るか教えてください。
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