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FLAGタグの配列を間違えました。 トピック削除
No.469-TOPIC - 2007/11/10 (土) 00:44:41 - 残念な院生
初めてトピックスを作らせて頂きます。


タンパク質のクローニングをしようと、
プライマーを設計して、精製し、
シークエンスを読んでいて気がついたのですが、

プライマーの設計の段階で
FLAGタグの配列が間違ってしまいました。

本来、
GAC-TAC-AAG-GAC-GAC-GAT-GAC-AAG(DYKDDDDK)とするところを
GAC-TAC-AAC-GAC-GAC-GAT-GAC-AAG(DYNDDDDK)としてしまいました。

アミノ酸も正電荷酸性アミノ酸から
不電荷酸性アミノ酸に変わってしまいました。

こんなタグは、もう使えないのでしょうか?
プライマーの設計からやり直しなのでしょうか?
どうかアドバイスをお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.469-4 - 2007/11/11 (日) 12:11:11 - カエル
今後の実験にもよりますが、FLAGのポリクローナル抗体で検出できるなら、急ぎの実験には使えるのではないでしょうか?時間が有るなら、コンストラクトを作り直すことをお勧めします。

(無題) 解決済み 削除/引用
No.469-3 - 2007/11/10 (土) 17:22:55 - 残念な院生
…ですよね。
一時しのぎでは、クローニングする意味無いですもんね。

作り直します。


ご回答、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.469-2 - 2007/11/10 (土) 01:44:25 - A
実験系にもよりますがまあ普通作り直すでしょうね。あとあと
上手くいけばいいのですが、上手くいかなかった時にこの配列
の影響がどれくらいあるのか切り分けられませんから。
私ならあきらめて作り直します。

FLAGタグの配列を間違えました。 削除/引用
No.469-1 - 2007/11/10 (土) 00:44:41 - 残念な院生
初めてトピックスを作らせて頂きます。


タンパク質のクローニングをしようと、
プライマーを設計して、精製し、
シークエンスを読んでいて気がついたのですが、

プライマーの設計の段階で
FLAGタグの配列が間違ってしまいました。

本来、
GAC-TAC-AAG-GAC-GAC-GAT-GAC-AAG(DYKDDDDK)とするところを
GAC-TAC-AAC-GAC-GAC-GAT-GAC-AAG(DYNDDDDK)としてしまいました。

アミノ酸も正電荷酸性アミノ酸から
不電荷酸性アミノ酸に変わってしまいました。

こんなタグは、もう使えないのでしょうか?
プライマーの設計からやり直しなのでしょうか?
どうかアドバイスをお願いします。

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