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Pro-Q diamond トピック削除
No.445-TOPIC - 2007/11/05 (月) 05:41:48 - しゃく
リン酸化の検出にPro-Q diamond試薬を使うことになりました。

そこで知恵をお借りしたいのですが

1.この試薬は繰り返し使えるようですが、皆さんはどの時点で廃棄を決定していますか?使っているうちにバンドが薄くなったり、定量性が悪くなったりするのでしょうか?

2.脱色時に用いる、20%アセトニトリル-50mM 酢酸ナトリウム(pH4)液は保存可能でしょうか?可能であれば保存方法も教えてください。


よろしくお願いします。
 
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Pro-Qの構造 削除/引用
No.445-9 - 2010/04/28 (水) 09:26:53 - PK
Pro-Qの構造は、Fluo-5Fです。カルシウムイオンがキレートされる場所にガリウムがキレートされると3価にチャージされ、リン酸化部位とのアフィニティが生じます。

(無題) 削除/引用
No.445-8 - 2007/11/08 (木) 18:51:30 - しゃく
「す」さん
脱色液は、遮光保存したら室温で半年は持った、ということですね。

染色液は“生もの”扱いしようと思います。色々とありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.445-7 - 2007/11/07 (水) 11:20:29 - す
脱染液の保存状態の件、
うちの研究室では調整済みのものを
常温・褐色遮光プラボトルで保存しています。

遮光プラボトルを使っているのは、最初に調整したとき
たまたま通常のボトルを切らしていたからで深い意味は無いのですが、
ずっと遮光保存しているので遮光しなくて大丈夫か実践したことはありません。

また、Pro-Q Diamond染色液は ニートさん が仰るように
遮光して冷蔵保存すると寿命が延びます。
インビトロジェンに問い合わせたときにもそう言っていました。
ただ、冷蔵保存でも1年は持ちませんでした・・・ご参考まで。

(無題) 削除/引用
No.445-6 - 2007/11/05 (月) 17:18:28 - しゃく
「す」さん

ご返答ありがとうございます。
1.rapid protocolもbasic protocolも、再利用はあまりお勧めでは無さそうですね。
消費期限もあることですし、元の容器に戻すことは止めにすることにします。


2.心強い実証例ありがとうございます。

ニートさん

ご返答ありがとうございます。やはり再利用はなるべく避けた方が良さそうですね。とっても高価な試薬ですが…。染色液の遮光4℃保存は実行します。
ところで、脱色液は遮光保存するべきですか?

(無題) 削除/引用
No.445-5 - 2007/11/05 (月) 15:34:10 - ニート
私も貧乏なのでケチるのですが、やはり二回目以降は感度も悪くなり、バックも上がるように感じます。
使用する前にきちんとミリQでゲルをすすぐことと、使用後に遮光で4℃に保存すると若干持ちが良い気がします。

脱色液は室温で遮光保存していますが、一週間以上経っていたら作り直します(一週間というのは勘ですので科学的根拠ではないです)。どうせ酢酸ナトリウムとアセトニトリルを混ぜるだけなので。
本当は用事調整がベストかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.445-4 - 2007/11/05 (月) 15:30:16 - す
1.Pro-Q Diamondの再利用は、私もトライしたことがありますが
 ほとんど染まりませんでした。

 染色は、電子レンジで50度くらいに温めると15分くらいでできました。
 私の場合、どちらかというと脱染時間をポイントにしています。
 指定の脱染液で30分振盪後、Milli-Q水に替えて30分振盪くらいで
 丁度良い感じになります(ミニゲル1枚)。
 
 また(目的)蛋白量を乗せすぎると、
 リン酸化していない蛋白でもバンドが見えてしまうようです。


2.脱染液は常温で半年以上保存したものでも使用できています。

(無題) 削除/引用
No.445-3 - 2007/11/05 (月) 12:06:22 - しゃく
ももさん

ご返答ありがとうございます。それで初めて気付くことが出来たのですが、この試薬、半年持たないとは、、、消費期限が短いんですね。
ちょっとショックです。

染色時間の延長は実践したいと思います。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.445-2 - 2007/11/05 (月) 08:26:32 - もも
以前ProQ染色試薬の再利用したのですが、全く言っていいほど染まりませんでした。
原因としてはExp Dateが近すぎ為劣化が早まった感じがしました。
あと染色時間の延長等が必要だと思われます。

Pro-Q diamond 削除/引用
No.445-1 - 2007/11/05 (月) 05:41:48 - しゃく
リン酸化の検出にPro-Q diamond試薬を使うことになりました。

そこで知恵をお借りしたいのですが

1.この試薬は繰り返し使えるようですが、皆さんはどの時点で廃棄を決定していますか?使っているうちにバンドが薄くなったり、定量性が悪くなったりするのでしょうか?

2.脱色時に用いる、20%アセトニトリル-50mM 酢酸ナトリウム(pH4)液は保存可能でしょうか?可能であれば保存方法も教えてください。


よろしくお願いします。

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