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primer bank 削除/引用 No.40-8 - 2007/08/09 (木) 04:15:12 - にょ http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/ でプライマーを探すことも出来ます。 遺伝子によっては見つからないこともありますが、 90%以上の確率でキチンと動くプライマーを見つけられると思いますよ。

(無題) 削除/引用 No.40-7 - 2007/08/07 (火) 21:29:31 - a テンプレートにプラスミドとcDNAを用いた時、増幅効率が異なったりしませんか？プラスミドの場合精製していますので、PCR反応を阻害する物質が少ないからだと思います。 私は、cDNAを段階希釈したもを検量に使用しています。cDNAの場合は相対値になります。 primerは基本的にはPrimer3で設計していますが、TaKaRaで設計したものを使用することもあります。 私もひとりではじめましたが、メーカーのサポートに相談し解決してきましたので、頑張ってください。

追加で 削除/引用 No.40-6 - 2007/08/07 (火) 17:24:32 - mom ＞超実践バイオ実験イラストレイテッドに標準サンプルは試料と同じでもよいとかいてますが、 試料の含まれるコピー数？というかｃDNAの量はわからないとおもうのですが、どうしたらいいのでしょうか？ iCyclerは使ったことがないのですが、real timePCRをやられるのでしたら、機械に解析用のソフトがついているのではないですか？ 機械のマニュアル、またはソフトのマニュアルに検量線の作製方法や解析方法など書いてあるのではないでしょうか。メーカーに問い合わせても良いと思います。 iCyclerのものでなくても、機器に依存しない、理論的なことでしたら、Applied BiosystemsやTAKARAのホームページからでも参考になるようなマニュアルの類が見つかると思います。

(無題) 削除/引用 No.40-5 - 2007/08/07 (火) 16:41:20 - R 追伸 Real-time PCRに関するトピをここにアップしようと思いましたが、あまりにたくさんあってあげきれないのでご自分で調べてみてください。 このフォーラムのトピだけ読まれても相当勉強になると思います。

(無題) 削除/引用 No.40-4 - 2007/08/07 (火) 16:34:20 - R 同様な質問が、 「古いBioTechnicalフォーラム（readのみ）」 に何個かあったと思います。 探してみてください。

ありがとうございます 削除/引用 No.40-3 - 2007/08/07 (火) 16:08:25 - ｍ ＞＞検量線作成のための標準サンプル（希釈系列）何を使ったらいいのでしょうか？ ＞・cDNA ＞・PCR Product ＞・プラスミド ありがとうございます。 超実践バイオ実験イラストレイテッドに標準サンプルは試料と同じでもよいとかいてますが、 試料の含まれるコピー数？というかｃDNAの量はわからないとおもうのですが、どうしたらいいのでしょうか？ cDNAにしてもPCR Productにしてもコピー数とかわからなくても希釈系列をつくればOKなのでしょうか？ 教えてください。 ただ今勉強中です。ほんと素人ですみません。

(無題) 削除/引用 No.40-2 - 2007/08/07 (火) 14:49:55 - R > 検量線作成のための標準サンプル（希釈系列）何を使ったらいいのでしょうか？ ・cDNA ・PCR Product ・プラスミド > またprimerの作成はどうしていますか？ ・お金があれば外注。 ・なければPrimer3などで作製。（←マニュアルはネットで検索で見つかる） > また参考になる本でもございましたら、紹介してください。 ・「ここまでできるPCR最新活用マニュアル」 ・「バイオ実験で失敗しない　検出と定量のコツ」 などなど

リアルタイムPCR 削除/引用 No.40-1 - 2007/08/07 (火) 12:47:22 - ｍ 初心者です。 リアルタイムPCRをしなければいけなくなったのですが、 周りに経験者がいなく困ってます。 検量線作成のための標準サンプル（希釈系列）何を使ったらいいのでしょうか？ またprimerの作成はどうしていますか？ 教えてください。 また参考になる本でもございましたら、紹介してください。 うちにあるのはiCyclerです。

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