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(無題) 削除/引用 No.398-3 - 2007/10/26 (金) 00:54:11 - K どのようなサンプル前処理をなさっているのかわからないのですが、 血漿からなんらかの形で蛋白質を抽出してからサンプルバッファーに 再溶解してSDS−PAGEにかけていらっしゃるのですよね？ Eさんが書いていらっしゃることとそのまま同じなのですが、 一番の原因はEさんご指摘の通りアルブミンをはじめとする、 大量に存在する蛋白質が邪魔しているためと思われます。 血漿を流して抗体で認識できるだけの量のある蛋白質はアルブミンなど以外 （一説にはヒトで１４種類とも）にはそうそうないと思うので、何らかの 抽出・濃縮方法をとらないと検出は難しいと思います。

(無題) 削除/引用 No.398-2 - 2007/10/26 (金) 00:10:25 - E >[Re:1] はらたいらさんは書きました : > 現在、ヒトおよびマウスプラズマ（血漿）を用いてウェスタンを行なってます。しかし、SDS-PAGEの泳動が汚く、抗体反応後もスメアな状態で、とても目的のバンドを検出できる状態ではありません。 > これって、血漿中の夾雑物等の影響なのでしょうか？ > 教えてください!! たぶんですがそれは血漿中のアルブミンの影響だと思います。 私自身また私の同僚が血漿中のある蛋白質を幾つかの市販の カラムを使って精製しようとしたことがあるのですがアルブミンの ために全く出来ませんでした。ですから何も処理しないでウェスタン で検出しようと思っても多分無理かと。 例えば市販されているアルブミン除去カラムかキット（どっち だったか覚えてません）を使ってアルブミンを除く、またはもし 目的の蛋白質の抗体があるのであればそれを使って抗体カラムを 作って濃縮するなどしないとなかなか検出できないと思います。 もちろん目的の蛋白質がどれだけ血漿中に存在しているのかにも よりますが、ウェスタンでの検出を目指しているということですから それほど存在していないのでは？

血漿中タンパク質検出方法 削除/引用 No.398-1 - 2007/10/25 (木) 23:33:09 - はらたいら 現在、ヒトおよびマウスプラズマ（血漿）を用いてウェスタンを行なってます。しかし、SDS-PAGEの泳動が汚く、抗体反応後もスメアな状態で、とても目的のバンドを検出できる状態ではありません。 これって、血漿中の夾雑物等の影響なのでしょうか？ 教えてください!!

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