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(無題) 削除/引用 No.396-3 - 2007/10/26 (金) 09:03:50 - おお あ、失礼しました、核の物を分けるのですね。これは難しいですね。生理的な塩濃度ではクロマチンの構成タンパクはDNAにタイトについているようですから、PBSを使ってホモジナイズすればいいのかなと思いますが弱く結合しているものは取れてしまうようなきがします。 あと核マトリクスはなかなか溶けませんから、DNA結合画分と一緒になるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.396-2 - 2007/10/26 (金) 08:56:51 - おお 大抵は低張の溶液中でホモジナイズして細胞膜を壊し、遠心して、ペレットを同様のバッファーなどで洗って核分画とします。最初の遠心で上せいが細胞質分画です。 バッファーは中性領域で10mMぐらいのKClとMgやCaを1mMぐらい加えたものがよく使われます。場合によっては界面活性剤を少量添加することがありますが(NP-40を0.1%ぐらいとか)、細胞によっては核のものが出てくる可能性もあります。ペレットの洗じょうでは界面活性剤は必要ないでしょう。ホモジナイズのあと、細胞の状態を顕微鏡で見て細胞膜が壊れているか確認することも必要になるかもしれません。 最近はキットも出回っているのでそれで済ましてしまうことも可能かもしれません。

核タンパク質の分画 削除/引用 No.396-1 - 2007/10/25 (木) 22:04:12 - まかお 核タンパク質をDNA結合画分と可溶性画分に分画抽出してウェスタンを行いたいと考えています。 どなたか分画方法をご存知でしたら教えてください。よろしくお願いします。

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