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クローニングできない。。。 トピック削除
No.393-TOPIC - 2007/10/25 (木) 15:15:31 - hiroshi
全長が10kある遺伝子のクローニングをしたいと考えています。
すでに5'側の配列はdegenerate primerを使ったPCRで同定しているので、
あとはraceを行って、両端を決めてベクターに組み込むだけなのですが、
3'RACE(5-8kと思われる）が成功しません。
モデル生物ではないので、ゲノム情報ない状況です。
またcDNAライブラリー自体もないため、
何か他のいい方法を探しているのですが、
アドバイスいただけないでしょうか？
raceもLD-PCRでやってみましたがだめです。。
　
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(無題) 削除/引用
No.393-2 - 2007/10/28 (日) 04:11:46 - おお
3'RACE(5-8kと思われる）が成功しません。

ということですが、もっと短い物は取れるのでしょうか?もしそうなら短いものを取って配列をきめまたそこから伸ばしていくというのがいいと思いますがどうでしょう。
3'RACEシステム自身は大丈夫だとおもってますか?

クローニングできない。。。 削除/引用
No.393-1 - 2007/10/25 (木) 15:15:31 - hiroshi
全長が10kある遺伝子のクローニングをしたいと考えています。
すでに5'側の配列はdegenerate primerを使ったPCRで同定しているので、
あとはraceを行って、両端を決めてベクターに組み込むだけなのですが、
3'RACE(5-8kと思われる）が成功しません。
モデル生物ではないので、ゲノム情報ない状況です。
またcDNAライブラリー自体もないため、
何か他のいい方法を探しているのですが、
アドバイスいただけないでしょうか？
raceもLD-PCRでやってみましたがだめです。。
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